[发明专利]一种氯代烃高效好氧降解混合菌剂的制备方法与应用

摘要

本发明公开一种氯代烃好氧降解混合菌剂及其制备方法与应用，包括混合降解菌剂的筛选和驯化、混合降解菌剂的制备方法和混合降解菌剂的应用。本发明设定在葡萄糖共代谢条件下，30℃、pH7、摇床转速180rpm时，混合菌剂对氯代烃的降解效果最佳，降解率达68.1%。同时研究了混合降解菌剂与植物联合对TCE的修复技术。本发明筛选出三氯乙烯的好氧混合降解菌剂，提供了一种混合菌剂的富集培养方法，并利用这些微生物与植物联合降解水或土壤中的氯代烃污染物，对有机物污染的修复具有高效、经济、无二次污染的特点；修复地下水范围宽，可去除的污染物种类多，应用广泛。

主权项

一种氯代烃好氧降解混合菌剂的制备方法，包括驯化、分离和鉴定，其特征在于，包括以下步骤：（1） 取999.0mL基础培养基、1.0mL微量元素，摇匀后作为液体无机盐培养基备用；取50mL所述液体无机盐培养基，在温度为121℃的高压锅内灭菌20分钟，在超净台中冷却，再加入2 g受TCE污染的土壤，30 ℃，转速180 r/min条件下，避光、恒温振荡，培养36 h，获得培养菌液； （2） 取步骤（1）中获得的培养菌液5 mL, 转接到装有10 mg/L TCE和0.15 g/L葡萄糖的上述新鲜液体无机盐培养基中，驯化培养直至溶液浑浊得到驯化培养基； （3） 配置分离培养基，调pH至7.0，用去离子水定容至1000 mL，121 ℃高压蒸汽灭菌后，在超净台中冷却至38~40℃，在超净工作台中取步骤（2）获得的驯化培养基1 mL，按10倍稀释法将菌液稀释成10‑1‑10‑7梯度的菌悬液，取0.1 mL涂布于上述分离培养基上，用无菌涂布器涂布均匀，将培养皿置于30 ℃的生化培养箱中培养观察，48h后便可发现有明显菌落出现，挑选菌落，将其接种至上述分离培养基中，在温度30℃、转速180 r/min的振荡器中培养48 h得到菌液；（4）以所得菌液作为接种物，添加到含有TCE 50 mg/L的基础培养基中，菌液和基础培养基的体积比为1:10，培养温度为30 ℃，培养时间为36~48 h，经离心得到菌液，按体积比500：1加入酵母提取物和麦麸的保护剂，然后利用真空冷冻干燥机制备成固体氯代烃好氧降解混合菌剂。