[发明专利]一种制备多功能纳米载体的方法

摘要

本发明公开了一种通过退溶技术和层层组装修饰技术制备多功能纳米载体的方法。在搅拌条件下，在蛋白质的水溶液中,逐渐滴加不良溶剂乙醇，使蛋白质从溶液中逐渐析出并沉淀出来纳米粒子；加入戊二醛交联剂稳定纳米粒子结构后，用水洗涤；在纳米粒子表面交替沉积多层聚电解质膜，最外层沉积接枝有短链聚氧乙烯的聚电解质，得到聚电解质修饰的纳米粒子；进一步在聚氧乙烯的羧基端固定靶向分子适配体，从而得到多功能纳米载体。本发明制备方法简单、材料来源广泛、生产效率高，得到的纳米粒子具有良好的稳定性和靶向癌细胞等特点，有良好的应用前景。

主权项

一种制备多功能纳米载体的方法，包括以下步骤：1）将浓度为100mg/mL的蛋白质水溶液，调至pH=7；在磁力搅拌下，以0.5mL/min的速度加入乙醇，蛋白质水溶液与乙醇的体积比1：4，持续搅拌，然后加入0.8 % w/v 戊二醛交联剂，戊二醛与蛋白质质量比为1μg：1mg，反应6小时，离心洗涤，冻干，得到蛋白质纳米粒子；2）将相对分子质量为2000的一端带有羧基、一端带有醛基的聚乙二醇加入10mg/mL的相对分子质量为15000的聚烯丙基胺或者相对分子质量为15000聚赖氨酸溶液中，保持二者的质量比为4.3：1，调节混合溶液pH值为8.5，反应6小时后透析，冻干，得到聚烯丙基胺‑g‑聚乙二醇‑COOH或聚赖氨酸‑g‑聚乙二醇‑COOH；3）将聚阳离子、聚阴离子和聚烯丙基胺‑g‑聚乙二醇‑COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；或者将聚阳离子、聚阴离子和聚赖氨酸‑g‑聚乙二醇‑COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；4）取步骤1）制备的蛋白质纳米粒子分散于水中，得到浓度为0.5% w/w蛋白质粒子悬浮液，于离心管中超声分散，离心除去上清液；往离心管中加入1mL三蒸水，超声分散；加入步骤3）配制的聚阳离子溶液0.5mL，孵化15min，期间轻微振荡离心管；离心去上清，水洗，得到吸附聚阳离子的蛋白质纳米粒子悬浮液，然后加入步骤3）配制的0.5mL聚阴离子溶液，孵化15min，期间轻微振荡，离心去上清，水洗；重复以上过程，在纳米粒子表面交替吸附带相反电荷的聚电解质，组装2个双层后得到表面为聚阴离子的核壳结构的纳米粒子；5）将步骤4）所得的核壳结构的纳米粒子分散到 1mL三蒸水中，超声30s，加入0.5 mL步骤3）配制的聚烯丙基胺‑g‑聚乙二醇‑COOH或者聚赖氨酸‑g‑聚乙二醇‑COOH，反应15min，期间轻微振荡，然后离心去上清，水洗，得到表面为聚烯丙基胺‑g‑聚乙二醇‑COOH或聚赖氨酸‑g‑聚乙二醇‑COOH的纳米粒子；6）将步骤5）所得的微粒分散到 1mL三蒸水中，超声30s，加入0.5mL 1.5mg/mL N‑羟基琥珀酰亚胺溶液，孵化15min；再加入0.5mL 1.5mg/mL 的N‑二甲胺基丙基‑N’‑乙基碳二亚胺盐酸盐和6μg/mL适配体分子，反应20min，离心去上清，水洗，得到多功能纳米载体。