[发明专利]一种制备多功能纳米载体的方法

权利要求书

1.一种制备多功能纳米载体的方法，包括以下步骤：

1）将浓度为100mg/mL的蛋白质水溶液，调至pH=7；在磁力搅拌下，以0.5mL/min的速度加入乙醇，蛋白质水溶液与乙醇的体积比1：4，持续搅拌，然后加入0.8 % w/v 戊二醛交联剂，戊二醛与蛋白质质量比为1μg：1mg，反应6小时，离心洗涤，冻干，得到蛋白质纳米粒子；

2）将相对分子质量为2000的一端带有羧基、一端带有醛基的聚乙二醇加入10mg/mL的相对分子质量为15000的聚烯丙基胺或者相对分子质量为15000聚赖氨酸溶液中，保持二者的质量比为4.3：1，调节混合溶液pH值为8.5，反应6小时后透析，冻干，得到聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH；

3）将聚阳离子、聚阴离子和聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；或者将聚阳离子、聚阴离子和聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；

4）取步骤1）制备的蛋白质纳米粒子分散于水中，得到浓度为0.5% w/w蛋白质粒子悬浮液，于离心管中超声分散，离心除去上清液；往离心管中加入1mL三蒸水，超声分散；加入步骤3）配制的聚阳离子溶液0.5mL，孵化15min，期间轻微振荡离心管；离心去上清，水洗，得到吸附聚阳离子的蛋白质纳米粒子悬浮液，然后加入步骤3）配制的0.5mL聚阴离子溶液，孵化15min，期间轻微振荡，离心去上清，水洗；重复以上过程，在纳米粒子表面交替吸附带相反电荷的聚电解质，组装2个双层后得到表面为聚阴离子的核壳结构的纳米粒子；

5）将步骤4）所得的核壳结构的纳米粒子分散到 1mL三蒸水中，超声30s，加入0.5 mL步骤3）配制的聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或者聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH，反应15min，期间轻微振荡，然后离心去上清，水洗，得到表面为聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH的纳米粒子；

6）将步骤5）所得的微粒分散到 1mL三蒸水中，超声30s，加入0.5mL 1.5mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺溶液，孵化15min；再加入0.5mL 1.5mg/mL 的N-二甲胺基丙基-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐和6μg/mL适配体分子，反应20min，离心去上清，水洗，得到多功能纳米载体。

2.根据权利要求1所述的制备多功能纳米载体的方法，其特征是所说的蛋白质是牛血清白蛋白、人血清白蛋白或者明胶。

3.根据权利要求1所述的制备多功能纳米载体的方法，其特征是所说的聚阳离子是聚烯丙基胺盐酸盐、聚二烯丙基二甲基季铵盐、壳聚糖、胶原、聚赖氨酸、阳离子化葡聚糖、阳离子化聚丙烯酸酯或聚乙烯亚胺。

4.根据权利要求1所述的制备多功能纳米载体的方法，其特征是所说的聚阴离子是聚苯乙烯磺酸钠、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、硫酸软骨素、硫酸肝素、透明质酸、硫酸葡聚糖、DNA或羧甲基纤维素钠。