[发明专利]一种制备多功能纳米载体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备多功能纳米载体的方法，尤其是利用退溶技术和层层组装修饰技术相结合制备多功能纳米微粒的方法。

背景技术

药物纳米载体包括脂质体、胶束、纳米乳、聚合物纳米粒、固体脂质纳米粒、柔性囊泡，经表面修饰后可获得可控的生物学性质，进而在治疗或诊断上同时执行多种重要功能。 纳米技术对医学发展具有重要的推动作用，疾病诊断、预防和治疗的实际需求对纳米技术提出了获得更先进的药物传输系统和早期检测与诊断技术的期望，如早期诊断和预警；代谢产物中的生物标志物的发现及其微量或痕迹量或瞬间的样品量的检测技术；适于大量或批量的实用检测技术平台；靶向、缓释、可控的药物载体等。 

理想的纳米药物载体具备以下性质：①具有较高的载药量；②具有较高的包封率；③有适宜的制备及提纯方法；④载体材料可生物降解，毒性较低或没有毒性；⑤具有适当的粒径与粒形；⑥具有较长的体内循还时间。延长纳米粒在体内的循环时间，能使所载的有效成分浓度增大且循环时间延长，这样药物能更好地发挥全身治疗或诊断作用，增强药物在病灶靶部位的疗效。

近年来，发展了许多新的纳米载体的制备方法，如多嵌段共聚物形成胶束或囊泡、脂质体、树枝状聚合物等。其中，由于蛋白的可降解性和生物相容性，以蛋白质为原料采用退溶法得到尺寸均匀可控的纳米粒子的方法被广泛应用。而这种方法制备的蛋白纳米粒子缺乏多功能和良好的稳定性，需要对其表面进行修饰以达到多功能性。而以胶体微粒为模板，利用层层自组装技术在模板粒子上组装聚合物超薄膜，具有结构和性能可控、易赋予各种独特功能等特点。尤其是各种活性基团为下一步接枝靶向分子奠定了基础。纳米微粒及其表面包覆的多层膜的渗透性以及包埋物质的释放性能可以通过环境条件如温度、离子种类和离子强度、pH值、溶液性质、光、电、声等进行控制。因此在药物控制释放、酶的包埋与催化反应、组织工程等领域显示了十分重要的应用前景。结合退溶技术和层层组装技术可以使充分发挥各自优势，制备出多功能纳米载体。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过退溶技术和层层组装修饰技术制备多功能纳米载体的方法。

本发明的制备多功能纳米载体的方法，包括以下步骤：

1）将浓度为100mg/mL的蛋白质水溶液，调至pH=7；在磁力搅拌下，以0.5mL/min的速度加入乙醇，蛋白质水溶液与乙醇的体积比1：4，持续搅拌，然后加入0.8 % w/v 戊二醛交联剂，戊二醛与蛋白质质量比为1μg：1mg，反应6小时，离心洗涤，冻干，得到蛋白质纳米粒子；

2）将相对分子质量为2000的一端带有羧基、一端带有醛基的聚乙二醇加入10mg/mL的相对分子质量为15000的聚烯丙基胺或者相对分子质量为15000聚赖氨酸溶液中，保持二者的质量比为4.3：1，调节混合溶液pH值为8.5，反应6小时后透析，冻干，得到聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH；

3）将聚阳离子、聚阴离子和聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；或者将聚阳离子、聚阴离子和聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH分别溶解于1M NaCl溶液中，各配成2mg/mL的聚电解质溶液；

4）取步骤1）制备的蛋白质纳米粒子分散于水中，得到浓度为0.5% w/w蛋白质粒子悬浮液，于离心管中超声分散，离心除去上清液；往离心管中加入1mL三蒸水，超声分散；加入步骤3）配制的聚阳离子溶液0.5mL，孵化15min，期间轻微振荡离心管；离心去上清，水洗，得到吸附聚阳离子的蛋白质纳米粒子悬浮液，然后加入步骤3）配制的0.5mL聚阴离子溶液，孵化15min，期间轻微振荡，离心去上清，水洗；重复以上过程，在纳米粒子表面交替吸附带相反电荷的聚电解质，组装2个双层后得到表面为聚阴离子的核壳结构的纳米粒子；

5）将步骤4）所得的核壳结构的纳米粒子分散到 1mL三蒸水中，超声30s，加入0.5 mL步骤3）配制的聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或者聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH，反应15min，期间轻微振荡，然后离心去上清，水洗，得到表面为聚烯丙基胺-g-聚乙二醇-COOH或聚赖氨酸-g-聚乙二醇-COOH的纳米粒子；