[发明专利]一种离子交换色谱分离乳源αs-酪蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种离子交换色谱分离乳源αs-酪蛋白的方法。本发明所述方法具有产品纯度高、操作简易、重复性好、分辨率高、成本低等优点，是酪蛋白纯化分离的重要手段和方法。经离子交换色谱分离的αs-酪蛋白可用于酪蛋白源生物活性肽的生产。

主权项

一种离子交换色谱分离乳源αs‑酪蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）以标准酪蛋白全素为原料，用样品缓冲液A配制浓度为4mg/ml的标准液，冰箱4℃放置12h，0.45μm滤膜过滤后备用；（2）取色谱柱，用20%乙酸浸泡24h后清洗备用；再取DEAE‑Sepharose CL‑6B，用样品缓冲液A浸泡，装柱，高度为30cm，再用样品缓冲液A平衡；（3）上样，样品溶液为10ml，继续用样品缓冲液A洗脱出未结合的蛋白，待未结合的蛋白完全洗脱出后改用样品缓冲液B进行不连续梯度洗脱，硫酸为2ml/min，收集每个梯度洗脱出来的峰进行检测，检测波长为280nm紫外可见光；（4）收集每个峰的洗脱液，SDS‑PAGE电泳检测，分离胶为12%，浓缩胶为5%；（5）将收集的每个峰的蛋白溶液透析后，经0.45μm过滤，然后进行反向高效液相色谱，其中，动相为0.1%TFA水溶液，流动相为100%乙腈溶液；梯度条件为32~49%流动相，0~40min；操作条件是流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，进样体积为70μl；其中，样品缓冲液A为含3M尿素、0.1%β‑巯基乙醇、pH值为8.0的50mM的tris‑HCl缓冲液；样品缓冲液B为含不同浓度NaCl的样品缓冲液A。