[发明专利]一种离子交换色谱分离乳源αs-酪蛋白的方法

权利要求书

1.一种离子交换色谱分离乳源α_s-酪蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）以标准酪蛋白全素为原料，用样品缓冲液A配制浓度为4mg/ml的标准液，冰箱4℃放置12h，0.45μm滤膜过滤后备用；

（2）取色谱柱，用20%乙酸浸泡24h后清洗备用；再取DEAE-Sepharose CL-6B，用样品缓冲液A浸泡，装柱，高度为30cm，再用样品缓冲液A平衡；

（3）上样，样品溶液为10ml，继续用样品缓冲液A洗脱出未结合的蛋白，待未结合的蛋白完全洗脱出后改用样品缓冲液B进行不连续梯度洗脱，硫酸为2ml/min，收集每个梯度洗脱出来的峰进行检测，检测波长为280nm紫外可见光；

（4）收集每个峰的洗脱液，SDS-PAGE电泳检测，分离胶为12%，浓缩胶为5%；

（5）将收集的每个峰的蛋白溶液透析后，经0.45μm过滤，然后进行反向高效液相色谱，其中，动相为0.1%TFA水溶液，流动相为100%乙腈溶液；梯度条件为32~49%流动相，0~40min；操作条件是流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，进样体积为70μl；

其中，样品缓冲液A为含3M尿素、0.1%β-巯基乙醇、pH值为8.0的50mM的tris-HCl缓冲液；样品缓冲液B为含不同浓度NaCl的样品缓冲液A。

2.根据权利要求1所述离子交换色谱分离乳源α_s-酪蛋白的方法，其特征在于步骤（3）中的动态吸附量为9.2mg/ml，上样量为40mg。

3.根据权利要求1所述离子交换色谱分离乳源α_s-酪蛋白的方法，其特征在于当原料为乳蛋白时，需通过等电点沉淀法（pI为4.6）除去乳蛋白中的乳清蛋白，然后得到酪蛋白，然后再进行后续处理步骤。