[发明专利]一种牛膝组培苗的获得方法

摘要

本发明具体地涉及一种牛膝组培苗的获得方法，它是先直接使用种子培养23-25天后，选择合适的幼苗作为外植体进行愈伤组织诱导，从选择源头上就减少了病虫害隐患，培养出来的苗木数量多、品质优，本方法操作简单，成本投入少，适宜大规模推广。

主权项

一种牛膝组培苗的获得方法，特征在于包括下列步骤：1)建立无菌植株：在5月份，选取色泽鲜亮、充实、饱满的牛膝种子流水冲洗10‑20分钟，在超净工作台上用70‑75％的乙醇浸泡20‑30秒，无菌水清洗3‑5次，在浓度为0.3‑0.5％的升汞中浸泡8‑10分钟后，取出用蒸馏水冲洗3次后接种到1/2MS+GA3(1‑2mg/L)+蔗糖(1000‑2000mg/L)培养基上，每个50ml三角瓶中8‑10粒；培养光照为1500‑2000lx，光照时间18小时/天，温度为26‑28℃；黑暗处理6小时/天，温度为16‑18℃，PH为5.8‑6.2，每5‑7天更新一次培养液；2)切取外植体：上述步骤中的种苗连续培养23‑25天后，选择无病、生长健壮的牛膝幼苗，切取带叶片茎段置于烧杯中，用纱布封口后流水冲洗2‑3小时，用75％乙醇浸泡20‑30秒，然后用0.1％升汞溶液灭菌5分钟后，立即用无菌水冲洗5次；3)诱导培养：用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，在无菌条件下用剪刀将牛膝的所有叶片剪下，保留少许叶柄，再用小刀切割怀牛膝茎段，使每个茎段含两个对生的腋芽，长1‑1.5cm；切割好后迅速接种于培养基上，培养基配方为：MS(500‑800mg/L)+2，4‑D(0.5‑3.0mg/L)+椰子汁(200‑500mg/L)+活性炭(500‑1000mg/L)+琼脂(500‑600mg/L)；培养条件与上述相同，连续培养15‑20天。