[发明专利]一种牛膝组培苗的获得方法

权利要求书

1.一种牛膝组培苗的获得方法，特征在于包括下列步骤：

1)建立无菌植株：在5月份，选取色泽鲜亮、充实、饱满的牛膝种子流水冲洗10-20分钟，在超净工作台上用70-75％的乙醇浸泡20-30秒，无菌水清洗3-5次，在浓度为0.3-0.5％的升汞中浸泡8-10分钟后，取出用蒸馏水冲洗3次后接种到1/2MS+GA₃(1-2mg/L)+蔗糖(1000-2000mg/L)培养基上，每个50ml三角瓶中8-10粒；培养光照为1500-2000lx，光照时间18小时/天，温度为26-28℃；黑暗处理6小时/天，温度为16-18℃，PH为5.8-6.2，每5-7天更新一次培养液；

2)切取外植体：上述步骤中的种苗连续培养23-25天后，选择无病、生长健壮的牛膝幼苗，切取带叶片茎段置于烧杯中，用纱布封口后流水冲洗2-3小时，用75％乙醇浸泡20-30秒，然后用0.1％升汞溶液灭菌5分钟后，立即用无菌水冲洗5次；

3)诱导培养：用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，在无菌条件下用剪刀将牛膝的所有叶片剪下，保留少许叶柄，再用小刀切割怀牛膝茎段，使每个茎段含两个对生的腋芽，长1-1.5cm；切割好后迅速接种于培养基上，培养基配方为：MS(500-800mg/L)+2，4-D(0.5-3.0mg/L)+椰子汁(200-500mg/L)+活性炭(500-1000mg/L)+琼脂(500-600mg/L)；培养条件与上述相同，连续培养15-20天。