[发明专利]一种用于氯霉素快速检测的直接包被ELISA方法无效
申请号: | 201110440576.6 | 申请日: | 2011-12-26 |
公开(公告)号: | CN103175955A | 公开(公告)日: | 2013-06-26 |
发明(设计)人: | 高志贤;白家磊;宁保安;彭媛;于广贵;柳明 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 300050*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明公开了一种氯霉素的快速检测方法,属于检验技术领域,本发明利用戊二醛对聚苯乙烯微孔板进行处理,在微孔板表面产生带有醛基基团的网络结构,通过醛基与氨基化氯霉素的氨基反应,从而将氨基化小分子半抗原直接偶联到微孔板表面,基于氨基化小分子半抗原直接偶联技术以及生物素-链霉亲和素放大系统建立了一种新型的氯霉素快速检测ELISA。该方法不仅可以避免小分子半抗原与大分子蛋白偶联的繁琐过程,而且其灵敏度比传统ELISA灵敏度提高了近20倍。氨基化小分子半抗原直接偶联ELISA方法在农药、兽药残留的检测应用中具有很大的潜力,可以用于快速检测试剂盒的研制。 | ||
搜索关键词: | 一种 用于 氯霉素 快速 检测 直接 包被 elisa 方法 | ||
【主权项】:
一种用于氯霉素快速检测直接包被ELISA方法,具体步骤如下(1)氨基化氯霉素的合成称取氯霉素64.6mg溶于700μL无水乙醇中,缓慢加入29.2mg锌粉,磁力搅拌器上加热反应40min;反应结束后12000rpm/min离心5min除去不溶物;采用液液萃取法对氨基化氯霉素进行纯化;(2)氨基化氯霉素的直接偶联微孔板使用0.01mol L‑1,pH9.6碳酸盐缓冲液将戊二醛(GA)稀释成6%,加入到中度吸附微孔板中,每孔200μL,37℃孵育2h;洗涤液(PBST)洗涤3次;用PBS缓冲液(80mmol L‑1,pH8.0)将25nM氨基化氯霉素稀释成适当浓度加入到微孔板中,37℃孵育2h;PBST洗涤后,加0.5%氨基乙酸溶液,37℃孵育1h;洗涤后干燥保存;(3)直接包被ELISA方法的建立在偶联好氨基化氯霉素的酶标板中,加入用含0.1%BSA的PBS稀释的50μL生物素化一抗和一系列浓度(0,0.02,0.1,1,10,25,50,100ng mL‑1)的氯霉素,37℃孵育1.5h,PBST洗涤四次后,每孔加入100μL SA‑HRP,37℃孵育45min;PBST洗涤6次,每孔加100μL底物显色液,37℃孵育10min后每孔中加50μL 2mol L‑1H2SO4终止反应后,用酶标仪进行读数。
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