[发明专利]一种用于氯霉素快速检测的直接包被ELISA方法无效
| 申请号： | 201110440576.6 | 申请日： | 2011-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN103175955A | 公开（公告）日： | 2013-06-26 |
| 发明（设计）人： | 高志贤;白家磊;宁保安;彭媛;于广贵;柳明 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300050*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 氯霉素 快速 检测 直接 包被 elisa 方法 | ||
1.一种用于氯霉素快速检测直接包被ELISA方法，具体步骤如下
(1)氨基化氯霉素的合成
称取氯霉素64.6mg溶于700μL无水乙醇中，缓慢加入29.2mg锌粉，磁力搅拌器上加热反应40min；反应结束后12000rpm/min离心5min除去不溶物；采用液液萃取法对氨基化氯霉素进行纯化；
(2)氨基化氯霉素的直接偶联微孔板
使用0.01mol L-1，pH9.6碳酸盐缓冲液将戊二醛(GA)稀释成6％，加入到中度吸附微孔板中，每孔200μL，37℃孵育2h；洗涤液(PBST)洗涤3次；用PBS缓冲液(80mmol L-1，pH8.0)将25nM氨基化氯霉素稀释成适当浓度加入到微孔板中，37℃孵育2h；PBST洗涤后，加0.5％氨基乙酸溶液，37℃孵育1h；洗涤后干燥保存；
(3)直接包被ELISA方法的建立
在偶联好氨基化氯霉素的酶标板中，加入用含0.1％BSA的PBS稀释的50μL生物素化一抗和一系列浓度(0，0.02，0.1，1，10，25，50，100ng mL-1)的氯霉素，37℃孵育1.5h，PBST洗涤四次后，每孔加入100μL SA-HRP，37℃孵育45min；PBST洗涤6次，每孔加100μL底物显色液，37℃孵育10min后每孔中加50μL 2mol L-1H2SO4终止反应后，用酶标仪进行读数。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，未经中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110440576.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
