[发明专利]一种非连接依赖性的快速克隆方法在审
| 申请号： | 201110418450.9 | 申请日： | 2011-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN103160495A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 张力军;徐晓昱 | 申请（专利权）人： | 张力军;徐晓昱 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210019 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种对供体DNA片段进行快速克隆的方法。该方法首先通过在扩增引物5’端引入附加序列使得供体DNA两末端与受体DNA两末端分别有至少12bp的同源序列；接着将受体DNA线性化，最后供体DNA与线性化的受体DNA在核酸外切酶和单链结合蛋白的催化下在体外高效形成重组中间体，该中间体直接转化感受态细胞即可完成供体DNA至受体DNA的克隆过程。本发明所述方法不需要对供体DNA进行酶切处理，即可实现单个供体DNA片段的快速定向克隆，也可实现多个供体DNA片段的一步拼接克隆，还可以用作DNA定点突变。该方法能够为遗传学、分子生物学、生物化学等研究以及高通量克隆提供一个快速高效的操作平台。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 连接 依赖性 快速 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种利用核酸外切酶和单链结合蛋白介导的体外同源重组反应对供体DNA片段进行快速克隆的方法，其特征在于：先通过在扩增引物5’端引入附加序列使得供体DNA两末端与受体DNA两末端分别有至少12bp的同源序列，再将受体DNA线性化，供体DNA与线性化的受体DNA在核酸外切酶和单链结合蛋白的催化下能在体外高效的形成重组中间体，该中间体直接转化感受态细胞就能完成供体DNA至受体DNA的克隆过程。
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