[发明专利]季节性流感病毒裂解疫苗的制备方法

摘要

本发明提供一种季节性流感病毒裂解疫苗的制备方法及该方法制备得到的疫苗，属于疫苗制备工艺技术领域。所述制备方法采用经检定证明为WHO推荐病毒株或相似株的甲1、甲3、乙型流感病毒株，经过传代建立工作种子库，接种鸡胚、培养收获病毒液、灭活病毒、超滤浓缩、区带离心、超滤除糖、柱层析、病毒裂解、二次纯化、过滤除菌步骤制备获得原液，然后通过半成品配置、成品包装制备得到季节性流感病毒裂解疫苗。本发明的方法将区带离心纯化和分子筛层析柱纯化进行组合，同时在病毒裂解后进行包括区带离心纯化步骤的二次纯化，具有浓缩效率及回收率好，成本低，效率高，容易操作的优点。最终制备得到的产品杂质含量低，HA含量高，内毒素、卵清蛋白标准远远优于《中国药典》2010版及《欧洲药典》的要求。而且，本发明的产品不含硫柳汞，接种更安全，接种人群更广泛。

主权项

一种季节性流感病毒裂解疫苗的制备方法，该方法包括按顺序实施的建立病毒种子批、接种与培养病毒、收获病毒、对病毒进行灭活处理、超滤浓缩、离心纯化、柱层析纯化、裂解病毒、二次纯化、过滤除菌、半成品配制的步骤，其中的病毒是甲1、甲3和乙型流感病毒株，其特征在于，其中的离心纯化步骤采用的是蔗糖速率区带离心法，包括将浓缩后的病毒液以不超过离心腔容积50％的上样量，在蔗糖溶液中以30000r/min区带离心3小时；其中的建立病毒种子批步骤包括：(1)主代种子库建立：由索取的原始毒种传代制备，将毒种复溶并稀释，取稀释度为103～105的病毒液接种9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种量0.2ml/胚，33～35℃培养48～72小时后收获尿囊液并混合，加等量脱脂牛奶后分装为0.2ml/支冻干后保存于‑60℃以下，经检定合格即为主代种子批；自原始毒种到制成主代毒种传代不得超过2代；(2)工作种子库建立：由主种子批毒种传代制备，将主代种子复溶，取稀释度为103～105的病毒液接种9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种量0.2ml/胚，33～35℃培养48～72小时后收获尿囊液并混合，分装后冻存于‑60℃以下，经检定合格即为工作种子批，自主代毒种到制成工作种子传代不得超过2代。