[发明专利]一种以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法

摘要

本发明公开了一种以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其中产物α-酮基丁酸是以含合成型L-苏氨酸脱水酶的微生物完整细胞作为生物催化剂，以L-苏氨酸为底物，在20～65℃，pH 7.0～11.0条件下，以50～250转/分钟振荡转化后获得。本发明的方法具有以下特点：(1)采用生物催化的方法，反应体系简单，反应条件温和，步骤简短，操作简便；生物催化剂可以容易地除去，便于后续产物分离纯化；(2)底物L-苏氨酸生成α-酮基丁酸的转化率高，可达99.6％以上，产物α-酮基丁酸可积累到较高浓度；(3)底物L-苏氨酸价格低廉，易于获得。本发明为实现α-酮基丁酸的高效生产奠定了基础。

主权项

一种以L‑苏氨酸为底物生产α‑酮基丁酸的方法，步骤是：(1)制备含生物催化剂的悬液选取假单胞菌属、棒杆菌属或芽孢杆菌属含合成型L‑苏氨酸脱水酶的菌株，在LB培养基中以常规摇瓶或者发酵罐方式有氧培养；分离并收集菌体，用pH 7.2～7.5磷酸钾缓冲液洗涤菌体2～4次，分离得到的微生物完整细胞即为生物催化剂；将生物催化剂重悬于上述磷酸钾缓冲液或者去离子水中，使生物催化剂浓度达到200克湿细胞/升，即得到含生物催化剂的悬液，4℃储存备用；(2)转化将步骤(1)中制得的含生物催化剂的悬液与L‑苏氨酸水溶液混合，并使混合物中L‑苏氨酸的浓度为10～80克/升、生物催化剂浓度为40～150克湿细胞/升；在20～65℃，pH7.0～11.0条件下，以50～250转/分钟振荡反应1～30小时，得转化液；(3)制取含α‑酮基丁酸的溶液将步骤(2)的转化液以5,000～14,000转/分离心5～25分钟，或者用200～400目滤布过滤，去除步骤(2)中加入的生物催化剂，所得清液即为含α‑酮基丁酸的溶液。