[发明专利]一种以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法有效
| 申请号： | 201110376233.8 | 申请日： | 2011-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN102433360A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 马翠卿;高超;张文;许平 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12P7/40 | 分类号： | C12P7/40;C12R1/38;C12R1/15;C12R1/125 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 苏氨酸 生产 丁酸 方法 | ||
1.一种以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，步骤是：
(1)制备含生物催化剂的悬液
选取假单胞菌属、棒杆菌属或芽孢杆菌属含合成型L-苏氨酸脱水酶的菌株，在LB培养基中以常规摇瓶或者发酵罐方式有氧培养；分离并收集菌体，用pH 7.2～7.5磷酸钾缓冲液洗涤菌体2～4次，分离得到的微生物完整细胞即为生物催化剂；将生物催化剂重悬于上述磷酸钾缓冲液或者去离子水中，使生物催化剂浓度达到200克湿细胞/升，即得到含生物催化剂的悬液，4℃储存备用；
(2)转化
将步骤(1)中制得的含生物催化剂的悬液与L-苏氨酸水溶液混合，并使混合物中L-苏氨酸的浓度为10～80克/升、生物催化剂浓度为40～150克湿细胞/升；在20～65℃，pH7.0～11.0条件下，以50～250转/分钟振荡反应1～30小时，得转化液；
(3)制取含α-酮基丁酸的溶液
将步骤(2)的转化液以5,000～14,000转/分离心5～25分钟，或者用200～400目滤布过滤，去除步骤(2)中加入的生物催化剂，所得清液即为含α-酮基丁酸的溶液。
2.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(1)所述含合成型L-苏氨酸脱水酶的菌株选施氏假单胞菌(P.stutzeri)SDM CCTCC NO：M206010、谷氨酸棒杆菌ATCC13032或枯草芽孢杆菌ATCC23857。
3.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述的L-苏氨酸的浓度是20～60克/升。
4.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述的生物催化剂浓度是60～120克湿细胞/升。
5.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述的温度选30～60℃。
6.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述的pH范围是8.0～10.0。
7.如权利要求1所述以L-苏氨酸为底物生产α-酮基丁酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述的反应时间为2～24小时。
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