[发明专利]棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫的多重PCR检测方法及检测用引物无效
| 申请号： | 201110348855.X | 申请日： | 2011-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN102363809A | 公开（公告）日： | 2012-02-29 |
| 发明（设计）人： | 李树清;李雯雯;张鸿满;陈韶红;黄维义;陈志飞;张子群;王巧全;张强;王艳;李健 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫的多重PCR检测方法，包括如下步骤：首先提取颚口线虫DNA，同时进行棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫特异引物设计。然后，对设计的引物进行PCR反应条件的优化，确定最佳多重PCR模式。按照最佳多重PCR模式进行实验，验证各引物单一PCR特异性、多重PCR特异性、PCR敏感性和临床样本操作的可行性。此外，本发明还公开了用于同时检测棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫的引物序列。通过各种验证表明本发明方法可以同时鉴定棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫，其快速、敏感、特异和同步鉴定3种颚口线虫的特点可应用于水产品颚口线虫的鉴定和检疫。 | ||
| 搜索关键词： | 棘颚口 线虫 日本 杜氏颚口 多重 pcr 检测 方法 引物 | ||
【主权项】：
一种棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫的多重PCR检测方法，其特征在于，具体步骤包括如下：①棘颚口线虫、日本颚口线虫、杜氏颚口线虫的虫体DNA提取；②引物设计与筛选；③对步骤②所设计的引物进行PCR反应条件优化，得到最佳多重PCR模式；④按照步骤③的最佳PCR反应条件进行单一PCR扩增特异性验证；⑤按照步骤③的最佳PCR反应条件进行多重PCR扩增特异性验证；⑥按照步骤③的最佳PCR反应条件进行PCR敏感性验证；⑦按照建立的多重PCR方法对临床虫种鉴定方法进行可行性验证。
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