[发明专利]H1N1、PRRSV、O-FMDV四重检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种四重同步核酸定量检测试剂盒，属于生物技术领域。本试剂盒包括PCR反应液，其中包括DEPC处理水、Taq酶、M-MLV反转录酶、RNase抑制剂、dNTPMix、10×一步法RT-PCRBuffer、MgCl2溶液，SEQIDNo.1~13所示的针对H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及O型口蹄疫病毒的引物和探针；试剂盒中还包括RNA提取液、阴性质控品、工作标准品、阳性质控品和临界阳性质控品。本发明采用实时荧光定量PCR技术定量检测甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒及O型口蹄疫病毒病毒核酸，具有特异、灵敏、快速、操作简便的优点。

主权项

一种甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与综合征病毒及O型口蹄疫病毒核酸定量检测引物和探针，包括如下的序列组：1）包括下述正向引物，反向引物和荧光探针的四组序列： a）针对甲型H1N1流感病毒matrix基因正向引物：5'‑ CATGGARTGGCTAAAGAC ‑3'，反向引物：5'‑ WAGGGCATTTTGGACAAA ‑3'，荧光探针：5'‑ ccaAtcTtgTcaCctct ‑3'，下标为LNA修饰；b）针对甲型H1N1流感病毒haemagglutinin基因正向引物：5'‑ TGCTGGATCTGGTATTATC ‑3'，反向引物：5'‑ ATCGGATGTATATTCTGAAATG ‑3'，荧光探针：5'‑ tcaGatAcaCcaGtccac ‑3' ，下标为LNA修饰；c）针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因正向引物：5'‑ CTTYCTTCTGGACACTAAG ‑3'，反向引物：5'‑ CTCTGGTTAWAGGGGTTG‑3'，荧光探针：5'‑ aacCrtCaaGcaCaactc ‑3' ，下标为LNA修饰；d）针对O型口蹄疫病毒VP1基因正向引物：5'‑ GTGACCTTCAAGTGTTRG ‑3'，反向引物：5'‑GGCCCTCTTCATGCGGTA ‑3'，5’‑ GGCTCTCTTCATTCTGTA  ‑3'荧光探针：5'‑ ctgCctAccTccTtcaac ‑3' ，下标为LNA修饰；2）上述1）中序列的5’端和/或3’端有延长的核苷酸片段的一组序列；3）与上述1）或2）中序列的同源性大于85%，且具有特异性的一组序列；4）与上述1）或2）或3）中序列的碱基互补的一组序列；5）上述1）、2）和3）中任何三个或多个序列形成的具有正向引物、反向引物以及与之向对应的荧光探针的分别对应上述a）~d）中所述基因的四组序列；其中，所述4种探针分别使用四种激发不同荧光信号的荧光基团；所述序列中, Y为C或T，R为A或G，W为A或T。