[发明专利]H1N1、PRRSV、O-FMDV四重检测试剂盒

权利要求书

1.一种甲型H1N1流感病毒、高致病性猪繁殖与综合征病毒及O型口蹄疫病毒核酸定量检测引物和探针，包括如下的序列组：

1）包括下述正向引物，反向引物和荧光探针的四组序列： 

a）针对甲型H1N1流感病毒matrix基因

正向引物：5'- CATGGARTGGCTAAAGAC -3'，

反向引物：5'- WAGGGCATTTTGGACAAA -3'，

荧光探针：5'- ccaAtcTtgTcaCctct -3'，下标为LNA修饰；

b）针对甲型H1N1流感病毒haemagglutinin基因

正向引物：5'- TGCTGGATCTGGTATTATC -3'，

反向引物：5'- ATCGGATGTATATTCTGAAATG -3'，

荧光探针：5'- tcaGatAcaCcaGtccac -3' ，下标为LNA修饰；

c）针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因

正向引物：5'- CTTYCTTCTGGACACTAAG -3'，

反向引物：5'- CTCTGGTTAWAGGGGTTG-3'，

荧光探针：5'- aacCrtCaaGcaCaactc -3' ，下标为LNA修饰；

d）针对O型口蹄疫病毒VP1基因

正向引物：5'- GTGACCTTCAAGTGTTRG -3'，

反向引物：5'-GGCCCTCTTCATGCGGTA -3'，5’- GGCTCTCTTCATTCTGTA  -3'

荧光探针：5'- ctgCctAccTccTtcaac -3' ，下标为LNA修饰；

2）上述1）中序列的5’端和/或3’端有延长的核苷酸片段的一组序列；

3）与上述1）或2）中序列的同源性大于85%，且具有特异性的一组序列；

4）与上述1）或2）或3）中序列的碱基互补的一组序列；

5）上述1）、2）和3）中任何三个或多个序列形成的具有正向引物、反向引物以及与之向对应的荧光探针的分别对应上述a）~d）中所述基因的四组序列；

其中，所述4种探针分别使用四种激发不同荧光信号的荧光基团；所述序列中, Y为C或T，R为A或G，W为A或T。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，其中，所述针对甲型H1N1流感病毒Matrix基因荧光探针的5’端和3’端分别使用荧光基团VIC和BHQ1修饰，针对甲型H1N1流感病毒Haemagglutinin基因荧光探针的5’端和3’端分别使用荧光基团ROX和BHQ2修饰，针对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因荧光探针的5’端和3’端分别使用荧光基团CY5和BHQ3修饰，而针对O型口蹄疫病毒VP1基因荧光探针的5’端和3’端分别使用荧光基团FAM和BHQ1修饰。

3.含有权利要求1或2所述引物和探针的三重同步核酸定量检测试剂盒。