[发明专利]一种提高牡蛎体内DHA含量的育种方法

摘要

本发明涉及一种提高牡蛎体内DHA含量的育种方法，利用来自于同一物种不同亚种或种群的纯种牡蛎为亲本，通过种内亚种间或种群间同源远交能够产生DHA含量高的杂种后代，本发明能够提高牡蛎体内的DHA含量达20%以上，效率高。本发明不需要转基因、药物处理等技术，操作简便，实用性强。本发明能够提高显著地牡蛎体内营养成分，从而可有效地遏制目前养殖牡蛎营养品质低下的问题，为高值化牡蛎品种的培育提供了一条新途径，市场前景广阔。

主权项

一种提高牡蛎体内DHA含量的育种方法，包括下列步骤：（1）种贝选择、纯种鉴定及性腺促熟：种贝必须源自于同一种牡蛎的不同亚种或种群的纯种，采用形态学和分子生物学方法对亲本进行纯种鉴定，通过人工方法调控种贝性腺同步成熟；（2）杂种与纯种组合的建立：以性腺成熟的种贝为材料，解剖分别获得精子和卵子，每种种贝的雌雄个体数至少20个，然后采用种内亚种间或种群间远交产生杂种组，同时，采用亚种内或种群内交配产生源自同一亲本的纯种组，作为杂种组的对照组；（3）幼虫培育与稚贝养成：幼虫培育在室内进行，主要包括培育密度、饵料、水温、盐度；稚贝养成在海上进行，幼虫培育的初始密度为2个/ml，每天全换水一次，充气培育；饵料为等鞭金藻和亚心形扁藻，日投饵3次，投饵量前3天为1万个藻类细胞/ml、接下来7天增加到5万个藻类细胞/ml，之后增加到10万个藻类细胞/ml；每两天对幼虫培养密度进行定量，并通过调节培养水体以使每个培育桶中的幼虫密度基本一致，幼虫培育期间不加抗生素，当20%~30%的幼虫出现眼点时，投放处理好的牡蛎壳、扇贝壳等采苗器进行采苗，按每个附着基附着8—10个稚贝投放，当水体中的浮游幼虫全部附着变态后，继续在室内培养一周左右，然后将附有稚贝的牡蛎壳或扇贝壳用绳子串起并做好标记，在天气晴朗的下午出池，挂到海上进行稚贝养成；之后，定期检查稚贝的生长和存活情况，6个月后，可生长到5cm‑6cm，为了降低环境效应，杂种组和纯种组从幼虫、稚贝，到成贝期间一直养殖在相同的环境条件下；（4）DHA含量的测定与比较：从杂种组和纯种组中各取至少15个成体牡蛎为材料，活体解剖获得新鲜的软体组织，同一种的组织先搅匀、真空冷冻干燥再研磨成粉，先用氯仿‑甲醇混合液抽提脂肪，然后用NaOH甲醇溶液对脂肪进行甲酯化，最后用气相色谱仪分析脂肪酸组分，测定出杂种组和纯种组样品中的DHA含量并进行比较。