[发明专利]红树植物总蛋白的提取以及双向电泳方法

摘要

本发明提供经济、简便、易行、快速的适用于红树植物的总蛋白的提取以及双向电泳方法，经反复实验证明该方法样品制备的重复性好且图谱清晰，其技术方案可专门适用于红树植物的蛋白质提取以及双向电泳方法。本发明使用20%TCA-丙酮溶液提取蛋白质，20%的TCA可以更好的去除盐离子，其中80%浓度的丙酮则对蛋白质与缩合单宁的复合物的分离作用效果显著，可较好分离该复合物，去除单宁，提高蛋白质浓度，用20%TCA-丙酮所提取的红树植物蛋白质含量较高，2-DE电泳图谱清晰，且操作简单，重复性好，试剂毒性较低。

主权项

一种红树植物总蛋白的提取以及双向电泳方法，其特征在于依次进行下列步骤：a、将定量的红树植物叶片置于液氮中研磨充分，将粉末转至离心管中，加入4倍体积20%的TCA‑丙酮溶液，涡旋混匀后，置于低温下沉淀；b、离心后收集沉淀，将该沉淀用预冷的丙酮洗涤，于低温高速涡旋离心后收集沉淀，再将沉淀置于室温晾干；c、向步骤b得到的沉淀加入裂解缓冲液，低温下溶解后离心，取上清液为蛋白提取样品；d、用Bradford法测定步骤c得到的蛋白提取样品的蛋白质含量；e、进行第一向固定pH梯度等电聚焦电泳：将步骤c得到的蛋白提取样品以及含电泳指示剂的上样缓冲液加入聚焦盘中，将IPG胶条胶面朝下放入蛋白提取样品溶液，加盖矿物油，设置好等电聚焦程序；f、进行胶条平衡：等电聚焦后的IPG胶条依次在第一平衡缓冲液和第二平衡缓冲液中平衡，然后转移至SDS‑聚丙烯酰胺凝胶的上端，琼脂糖封胶液封顶；g、进行第二向SDS‑PAGE电泳：先用低电流的恒流电泳，再加大电流直至电泳指示剂到达胶的底端即可停止电泳；h、取步骤g电泳后得到的凝胶进行高灵敏度染色。