[发明专利]多重PCR快速检测和鉴定五种李斯特菌的方法

摘要

本发明公开了了一种多重PCR快速检测和鉴定五种李斯特菌的方法，包括如下步骤：1）首先选择5条上游引物和1条下游引物；2）取阳性对照标准菌液和待检菌液分别制备基因组DNA模板；3）分别在阳性对照标准菌液制备的基因组DNA模板和待检菌液制备的基因组DNA模板中添加所述上游引物和下游引物进行PCR扩增反应；4）取扩增后的产物进行电泳；5）结果判定。本发明是一种快速、准确、灵敏的多重PCR检测和鉴定5种李斯特菌的方法，为分子生物学方法鉴定李斯特菌种提供选择。不仅提高了效率，节约时间，而且节省检测成本。

主权项

一种多重PCR快速检测和鉴定五种李斯特菌的方法，其特征在于包括如下步骤：1）首先选择5条上游引物和1条下游引物；2）取阳性对照标准菌液和待检菌液分别制备基因组DNA模板；3）分别在阳性对照标准菌液制备的基因组DNA模板和待检菌液制备的基因组DNA模板中添加所述上游引物和下游引物进行PCR扩增反应；4）取扩增后的产物5 μL点样于1%琼脂糖凝胶，其中含0.5 μg/mL溴化乙锭，以2000 bp Marker为标准分子参照，进行电泳；电泳结果用紫外凝胶成像系统分析；5）结果判定，待检样品与阳性对照同时扩增出230～250 bp条带的，判定为格氏李斯特菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出650～660 bp条带的，判定为单增李斯特菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出460～470 bp条带的，判定为威尔李斯特菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出360～370 bp条带的，判定为绵羊李斯特菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出860～870 bp条带的，判定为英诺克李斯特菌阳性。