[发明专利]一种绵羊支原体肺炎抗性基因型的筛选方法

摘要

本发明属于生物检测技术领域，具体说是涉及一种绵羊支原体肺炎抗性基因型的筛选方法，本发明从补体角度入手，通过对绵羊自身MBL基因的研究，研究发现其多态性与绵羊支原体的抗性紧密相关，预测MBL基因为绵羊支原体肺炎抗性性状的候选基因，可作为选育高抗性绵羊的分子标记，并能快速、准确地建立抗绵羊支原体肺炎新品系，同时，本发明也可为该疾病的治疗提供新的思路，MBL作为广泛参与多种疾病免疫途径的重要因素，该发明为其它疾病研究提供借鉴，对合理开发利用新疆地方绵羊品种遗传资源以及引进新品种具有重要的现实意义，为进一步选育绵羊支原体肺炎抗性基因型个体奠定实验基础。

主权项

一种绵羊支原体肺炎抗性基因型的筛选方法，其特征是：绵羊支原体肺炎抗性基因的多态性分析及提取筛选，具体筛选包括以下方法：(1)样品采集和绵羊基因组DNA的提取；(2)对MBL外显子1和4、内含子1和2逐段进行多态性分析，设计了7对引物，进行PCR扩增，筛选出与MBL水平相关的基因型21种，其中外显子1上有4种基因型，即AA、BB、CC和BC型，含5个突变位点，分别位于第27、41、43、83、105位点，其中g.27T＞C和g105C＞T为同义突变，g41T＞A、Val14 Glu，g43G＞A、Val15 Met，g83A＞G、Glu28 Gly3处为错义突变；外显子4上有3种基因型，即GG、GH和HH型，含5个突变位点，分别位于第3235、3243、3257、3331、3334位点，其中g.3235T＞C，g.3331C＞T，g.3334C＞T为同义突变，g.3243A＞G、Glu 181 Gly，g.3257G＞A、Gly 186 Ser、2处为错义突变；内含子1上有3种基因型，含AA、BB、AB型，1个突变位点，位于第288位点；内含子2上有11种基因型，包括PP、OP、CC、CD、DD、EE、EF、FF、GG、GH、HH型，含3个突变位点，分别位于第1091、1096、1784位点，均为同义突变位点；(3)进行绵羊支原体肺炎EILSA抗体水平检测，以外显子1的多态性分析为基础，对同一基因型绵羊支原体肺炎阴性和阳性不同个体进行差异显著性分析，筛选出绵羊支原体肺炎抗性基因型和易感性基因型；(4)以外显子1的多态性分析为基础，筛选出中国美利奴羊四种不同MBL基因型，即BB型、BC型、CC型和DD型各9只，建立供试群体，EILSA检测群体MBL水平，结果显示CC型MBL血清水平最高，BB、BC次之，DD型MBL血清水平最低，预测CC型为抗性组，DD型为易感组，人工感染绵羊肺炎支原体，结果抗性组中发病2只，未发病7只；易感组中发病7只，未发病2只，对照组均未发病，BC组中发病5只，未发病5只；BB组中发病5只，未发病4只，表明抗性组绵羊支原体肺炎的感染率显著低于易感组。