[发明专利]一种绵羊支原体肺炎抗性基因型的筛选方法

权利要求书

1.一种绵羊支原体肺炎抗性基因型的筛选方法，其特征是：绵羊支原体肺炎抗性基因的多态性分析及提取筛选，具体筛选包括以下方法：

(1)样品采集和绵羊基因组DNA的提取；

(2)对MBL外显子1和4、内含子1和2逐段进行多态性分析，设计了7对引物，进行PCR扩增，筛选出与MBL水平相关的基因型21种，其中外显子1上有4种基因型，即AA、BB、CC和BC型，含5个突变位点，分别位于第27、41、43、83、105位点，其中g.27T＞C和g105C＞T为同义突变，g41T＞A、Val14 Glu，g43G＞A、Val15 Met，g83A＞G、Glu28 Gly3处为错义突变；外显子4上有3种基因型，即GG、GH和HH型，含5个突变位点，分别位于第3235、3243、3257、3331、3334位点，其中g.3235T＞C，g.3331C＞T，g.3334C＞T为同义突变，g.3243A＞G、Glu 181 Gly，g.3257G＞A、Gly 186 Ser、2处为错义突变；内含子1上有3种基因型，含AA、BB、AB型，1个突变位点，位于第288位点；内含子2上有11种基因型，包括PP、OP、CC、CD、DD、EE、EF、FF、GG、GH、HH型，含3个突变位点，分别位于第1091、1096、1784位点，均为同义突变位点；

(3)进行绵羊支原体肺炎EILSA抗体水平检测，以外显子1的多态性分析为基础，对同一基因型绵羊支原体肺炎阴性和阳性不同个体进行差异显著性分析，筛选出绵羊支原体肺炎抗性基因型和易感性基因型；

(4)以外显子1的多态性分析为基础，筛选出中国美利奴羊四种不同MBL基因型，即BB型、BC型、CC型和DD型各9只，建立供试群体，EILSA检测群体MBL水平，结果显示CC型MBL血清水平最高，BB、BC次之，DD型MBL血清水平最低，预测CC型为抗性组，DD型为易感组，人工感染绵羊肺炎支原体，结果抗性组中发病2只，未发病7只；易感组中发病7只，未发病2只，对照组均未发病，BC组中发病5只，未发病5只；BB组中发病5只，未发病4只，表明抗性组绵羊支原体肺炎的感染率显著低于易感组。