[发明专利]一种微囊藻毒素荧光标记的方法

摘要

本发明提供了公开了一种微囊藻毒素荧光标记的方法，其步骤：A、在pH的充氮气保护并室温震荡下，将微囊藻毒素与半胱氨酸以摩尔比在5%的K2CO3溶液中反应，得到微囊藻毒素的半胱氨酸衍生物；B、通过色谱仪并设置条件进行纯化，除去反应液中过量的半胱氨酸，得到纯化的MC-Cys；C、将纯化后的MC-Cys与异硫氰酸荧光素以摩尔比在硼酸盐缓冲液中反应，在室温下振荡反应，得到偶联FITC的藻毒素；D、通过色谱仪并设置条件进行纯化，除去反应液中过量的FITC，得到纯化的MC-Cys-FITC。方法易行，操作简便，使用半胱氨酸作为中间连接体将微囊藻毒素和异硫氰酸荧光素连接，对微囊藻毒素进行荧光标记。得到纯度为95%的MC-Cys-FITC，为微囊藻毒素毒理学方面的研究提供直接实验证据。

主权项

一种微囊藻毒素荧光标记的方法，其步骤是：A、在pH9‑13的充氮气保护并室温震荡的条件下，将微囊藻毒素与半胱氨酸以1：20的摩尔比在5%的K2CO3溶液中反应9‑11 h，得到微囊藻毒素的半胱氨酸衍生物； B、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化，除去反应液中过量的Cys，得到纯化的MC‑Cys； C、将纯化后的MC‑Cys与异硫氰酸荧光素以1：2的摩尔比在硼酸盐缓冲液中反应，pH 8.5‑9.5，在室温下振荡反应9‑11 h，得到偶联FITC的藻毒素MC‑Cys‑FITC； D、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化，除去反应液中过量的FITC，得到纯化的藻毒素‑半胱氨酸‑异硫氰酸荧光素的偶合物；所述的（B）步骤制备色谱条件是：流动相：A：H2O+0.1% TFA；B：ACN+0.1% TFA，流速：15 mL/min，检测波长：238 nm，进样量30 mL，检测器：可见紫外分光检测器，制备柱： XTerra Prep MS C18 Column，HPLC色谱分离梯度条件是：时间/min   流动相A%  流动相B%O             90           105             72           288             70           308.5           70           309             10           9010            10           9010.5          90           10所述的（D）步骤制备色谱条件是：流动相：A：25 nM乙酸铵；B：CAN，流速：15 mL/min，检测波长：238 nm，进样量30 mL，检测器：可见紫外分光检测器，制备柱： XTerra Prep MS C18 Column，HPLC色谱分离梯度条件是：时间/min   流动相A%  流动相B%O            90            105            74            2612           70            3012.5         70            3013           10            9014           10            9014.5        90             10。