[发明专利]一种微囊藻毒素荧光标记的方法

权利要求书

1.一种微囊藻毒素荧光标记的方法，其步骤是：

A、在pH9-13的充氮气保护并室温震荡的条件下，将微囊藻毒素与半胱氨酸以1：20的摩尔比在5%的K₂CO₃溶液中反应9-11 h，得到微囊藻毒素的半胱氨酸衍生物；

 B、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化，除去反应液中过量的Cys，得到纯化的MC-Cys；

 C、将纯化后的MC-Cys与异硫氰酸荧光素以1：2的摩尔比在硼酸盐缓冲液中反应，pH 8.5-9.5，在室温下振荡反应9-11 h，得到偶联FITC的藻毒素MC-Cys-FITC；

 D、通过高效液相色谱仪并设置一定的制备色谱条件进行纯化，除去反应液中过量的FITC，得到纯化的藻毒素-半胱氨酸-异硫氰酸荧光素的偶合物；

所述的（B）步骤制备色谱条件是：

流动相：A：H₂O+0.1% TFA；B：ACN+0.1% TFA，流速：15 mL/min，检测波长：238 nm，进样量30 mL，检测器：可见紫外分光检测器，制备柱： XTerra Prep MS C₁₈ Column，HPLC色谱分离梯度条件是：

时间/min   流动相A%  流动相B%

O             90           10

5             72           28

8             70           30

8.5           70           30

9             10           90

10            10           90

10.5          90           10

所述的（D）步骤制备色谱条件是：

流动相：A：25 nM乙酸铵；B：CAN，流速：15 mL/min，检测波长：238 nm，进样量30 mL，检测器：可见紫外分光检测器，制备柱： XTerra Prep MS C₁₈ Column，HPLC色谱分离梯度条件是：

时间/min   流动相A%  流动相B%

O            90            10

5            74            26

12           70            30

12.5         70            30

13           10            90

14           10            90

14.5        90             10。