[发明专利]伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR检测试剂盒及制备方法

摘要

本发明公开一种伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR鉴别检测试剂盒，用于伊氏锥虫与路氏锥虫快速PCR检测，本发明还提供了该试剂盒的制备方法，利用二重PCR特异性检测方法，根据伊氏锥虫和路氏锥虫种特异基因序列设计引物，通过优化PCR反应体系和条件来提高其敏感性，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后观察结果。本发明可同时对伊氏锥虫和路氏锥虫进行快速准确的检测与鉴别，具有简单方便、灵敏度高、特异性强等特点。

主权项

一种伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR检测试剂盒，包括以下部分：（1）样本裂解液与DNA提取试剂样本裂解液：NaCl、Tris‑HCl、EDTA、SDS和蛋白酶K的混合溶液；其中，浓度配比为：NaCl 100mM、Tris‑HCl(pH 7.5)20Mm、EDTA 25 Mm、SDS 2%（w/v）和蛋白酶K 0.1μg/μl；DNA提取试剂为酚:氯仿:异戊醇（24:25:1）；（2）PCR反应液：含反应终浓度各100‑300μM的4种dNTPs，反应终浓度各10‑100pmol/μl的引物，1.5‑4.5mM的Mg2+浓度；DNA聚合酶，灭菌蒸馏水；（3）二重PCR引物：伊氏锥虫引物TE‑a与TE‑s，路氏锥虫引物TL‑a与TL‑s；（4）阳性对照：阳性对照为伊氏锥虫DNA和路氏锥虫DNA；（5）阴性对照：取灭菌蒸馏水为阴性对照样本。