[发明专利]乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针

摘要

本发明公开了一种乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒、检测方法、引物及其探针，属于生物技术领域。该方法涉及一种引起人类各种急慢性及重型肝炎的病毒基因检测技术，适用于乙型肝炎病毒定性定量检测。本试剂盒包括PCR反应液，其中包括DEPC处理水、Taq酶、dNTPs、10×PCR Buffer、含有Mg2+离子的溶液、乙型肝炎病毒正向引物：5′-TTGTCCTGGYTATCGYTGGAT-3′、乙型肝炎病毒反向引物：5′-TGAGGCATAGCAGCAGGATGA-3′、乙型肝炎病毒探针5′-CTGCGGCGTTTTAT-3′；试剂盒中还包括DNA提取液、阴性质控品、工作标准品、阳性质控品和临界阳性质控品。本发明采用实时荧光定量PCR技术定量检测乙型肝炎病毒核酸，具有特异、灵敏、快速、操作简便的优点。

主权项

一种乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有：(1)PCR反应液，其中包括DEPC处理水、具有5’→3’外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCRBuffer、含有Mg2+离子的溶液、乙型肝炎病毒正向引物、乙型肝炎病毒反向引物、乙型肝炎病毒探针；乙型肝炎病毒正向引物如序列表中SEQ  ID  NO.1所示：5′‑TTGTCCTGGYTATCGYTGGAT‑3′，乙型肝炎病毒反向引物如序列表中SEQ  ID  NO.2所示：5′‑TGAGGCATAGCAGCAGGATGA‑3′，乙型肝炎病毒探针如序列表中SEQ ID NO.3所示：5′‑CTGCGGCGTTTTAT‑3′；其中，所述荧光探针的5’端和3’端分别用荧光基团修饰；所述引物序列中，Y＝(C/T)；(2)DNA提取液；(3)阴性质控品，为不含乙型肝炎病毒Pre‑S基因的pUCm‑T载体质粒DNA片段；(4)阳性质控品，为1.0×106copy/mL含乙型肝炎病毒基因组DNA片段；(5)临界阳性质控品，为1.0×104copy/mL含乙型肝炎病毒基因组DNA片段；(6)工作标准品，为含有乙型肝炎病毒的高度保守基因‑Pre‑S基因的71个碱基对的核苷酸片段的pUCm‑T重组质粒，该质粒在大肠杆菌DH5α中增殖。