[发明专利]一种鉴定山羊早期胚胎性别的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定山羊早期胚胎性别的方法，包括1)取少量山羊发情后第7～8天胚胎做为样品；2)将胚胎样品、洗涤、灭菌超纯水煮沸10min、然后5000g离心3min，取上清液直接作为模板进行PCR反应；3)在新的PCR管中加入4μL PCR Mix液、10μmol/L上下游巢式外引物各0.15μL、5μL模板、8μL灭菌超纯水，共20μL，扩增；4)在3μL PCR产物中加入7μL PCRMix和上下游巢式内引物，扩增；5)将扩增产物于1.5％的琼脂糖凝胶电泳，出现两条带者为雄性样品，一条带者为雌性样品。该方法能够稳定地扩增出相应基因序列，具有较高的准确定和敏感性。

主权项

一种鉴定山羊早期胚胎性别的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)取少量山羊发情后第7～8天胚胎做为样品；2)将胚胎样品用无钙镁的磷酸缓冲液中洗涤三次，在100℃灭菌超纯水煮沸10min，然后5000g离心3min，取上清液直接作为模板进行PCR反应；3)在新的PCR管中加入4μL PCR Mix液、10μmol/L上下游巢式外引物各0.15μL、5μL模板、8μL灭菌超纯水，共20μL，在PCR仪中预变性94℃ 5min；然后94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，共22个循环；最后72℃延伸5min；所述的上游巢式外引物：5′‑CATGGT GCCAGCTCAGCAG‑3′所述的下游巢式外引物：5′‑CCGCTTGGTCTTGTCTGTTGC‑3′4)在3μL PCR产物中加入7μL PCR Mix和上下游巢式内引物，预变性94℃ 5min；94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，共40个循环；最后72℃延伸5min，停止反应；上游巢式内引物：5′‑CAGCAACCAATGATGCCAGTTC‑3′下游巢式内引物：5′‑GTCTTGTCTGTTGCTGGCCA‑3′5)将扩增产物于1.5％的琼脂糖凝胶电泳后于凝胶成像仪中观察，出现两条带者为雄性样品，一条带者为雌性样品。