[发明专利]一种鉴定山羊早期胚胎性别的方法

权利要求书

1.一种鉴定山羊早期胚胎性别的方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)取少量山羊发情后第7～8天胚胎做为样品；

2)将胚胎样品用无钙镁的磷酸缓冲液中洗涤三次，在100℃灭菌超纯水煮沸10min，然后5000g离心3min，取上清液直接作为模板进行PCR反应；

3)在新的PCR管中加入4μL PCR Mix液、10μmol/L上下游巢式外引物各0.15μL、5μL模板、8μL灭菌超纯水，共20μL，在PCR仪中预变性94℃ 5min；然后94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，共22个循环；最后72℃延伸5min；

所述的上游巢式外引物：5′-CATGGT GCCAGCTCAGCAG-3′

所述的下游巢式外引物：5′-CCGCTTGGTCTTGTCTGTTGC-3′

4)在3μL PCR产物中加入7μL PCR Mix和上下游巢式内引物，预变性94℃ 5min；94℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 30s，共40个循环；最后72℃延伸5min，停止反应；

上游巢式内引物：5′-CAGCAACCAATGATGCCAGTTC-3′

下游巢式内引物：5′-GTCTTGTCTGTTGCTGGCCA-3′

5)将扩增产物于1.5％的琼脂糖凝胶电泳后于凝胶成像仪中观察，出现两条带者为雄性样品，一条带者为雌性样品。

2.根据权利要求1所述的鉴定山羊早期胚胎性别的方法，其特征在于，所述的PCR Mix液中包括50mmol/L KCl、20mmol/L Tris-HCl、3mmol/LMgSO₄、400mmol/L dNTPs和0.1U/μL Taq DNA聚合酶。

3.根据权利要求1所的鉴定山羊早期胚胎性别的方法，其特征在于，所述的电泳条件是75V，30min。