[发明专利]一种通过转CgHSP70基因提高菊花抗逆性的方法

摘要

本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CgHSP70基因提高切花菊抗逆性的方法。将从菊花“钟山紫桂”中克隆得到的CgHSP70基因构建植物表达载体采用农杆菌介导法转入到切花菊中，进行培养初步获得抗性植株，经过潮霉素抗性筛选得到阳性转化植株。对转化植株进行PCR和荧光定量PCR分析，证实内源基因已经转入到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株后代进行抗性分析证实其对高温、干旱及高盐的抗性有明显的提高。本发明通过转化内源CgHSP70基因并正常转录表达，及在逆境下诱导该基因的表达从而提高切花菊的抗逆性，为利用基因工程技术选育菊花抗逆性品种提供新颖而使用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。

主权项

一种通过转CgHSP70基因提高菊花抗逆性的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)构建CgHSP70基因的植物表达载体：以菊花‘钟山紫桂’为材料，提取总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板，设计引物进行PCR反应，在CgHSP70基因的上下游分别引入SmaI和XbaI酶切位点，上游引物为：CgHSP70‑F：5′‑CCCCGGGATGGCTGGTAAAGGTGAA‑3′，下游引物为CgHSP70‑R：5′‑AGTAGAACAGATAAATATCGACCACA‑3′，将扩增出来的含有CgHSP70完整开放阅读框的PCR产物片段与T‑载体连接后转化大肠杆菌DH5α感受态，提取阳性质粒，由SmaI和XbaI双酶切得到的CgHSP70基因片段，与SmaI和XbaI双酶切线性化的表达载体pCAMBIA1301连接，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒，酶切电泳检测并测序验证，植物表达载体pCAMBIA1301‑CgHSP70构建成功，所述的CgHSP70基因序列为SEQ IDNO.1；(2)采用农杆菌介导法将CgHSP70基因的植物表达载体转入到切花菊中，进行培养初步获得抗性植株。