[发明专利]一种高纯度河豚毒素的提取方法

摘要

本发明公开一种高纯度河豚毒素的提取方法，主要用于由动物原料河豚鱼籽和肝脏中提取河豚毒素，联合运用超声波快速溶出、有机溶剂脱脂、板框多级过滤、阳离子离子交换树脂、小型膜过滤及高效液相制备等方法，获得高纯度、高稳定性河豚毒素结晶。河豚毒素具有阻断钠离子通道的作用，镇痛效果明显，无依赖性，广泛用于癌症晚期、术后止疼以及药物滥用的脱瘾治疗等。高纯度河豚毒素的制备提取，为研制新型高效、无依赖性的镇痛新药提供可能。

主权项

一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征在于包括以下工艺步骤：a、原液制备：将河豚鱼籽或肝脏分割成块或条，加1‑5倍的去离子水，置于超声波中超声1‑2小时，连续3‑5次，至检测无河豚毒素止；超声后的料液置于甩水机中，将料液甩出；合并甩出料液，快速煮沸5‑15分钟，快速冷却，用300‑400目的滤布将蛋白等固形物滤出，将料液用二氯甲烷脱脂，再用板框过滤机用滤纸和微孔滤膜进行两级过滤，板框透过液转离子交换系统备用；b、离子交换：将a步骤中经板框过滤后的原液，上阳离子交换柱进行离子交换，用5‑20％的醋酸开始洗脱，用动物法监测出毒时间，洗脱至流出液无毒停止收集，合并收集液备用；c、膜过滤：将b步骤中经离子交换后的收集液，进入膜过滤系统进行超滤和纳滤，进一步对其进行脱水浓缩，去除分子量1000以上和200以下的非有效成分，并减压浓缩至小体积备用；d、高效液相色谱制备将c步骤中经膜过滤后的料液用高效液相色谱制备，收集有效成分，低温减压浓缩，置冰箱中低温冷藏备用；e、结晶：将d步骤中置冰箱中冷藏后的液体，加8‑15％的氨水调PH8‑10，强力振摇，低温沉降后，得河豚毒素白色沉淀；将白色沉淀用离心机高速离心，用乙醇洗涤后减压干燥，得99％以上的高纯度河豚毒素结晶。