[发明专利]一种高纯度河豚毒素的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋生物技术领域，主要涉及由动物原料提取高纯度单体物质，特别是一种由河豚鱼籽和肝脏中获得高纯度河豚毒素的提取方法。

背景技术

河豚毒素是海洋洄游鱼类河豚鱼中的特有成分，主要存在于卵巢、肝脏及血液中。研究表明，在其它的鱼类、两栖类、软体动物、棘皮动物中，也发现有河豚毒素的存在，如虎虾鱼、蓝环章鱼、加州蟒螈等，甚至甲壳类蟹也有发现的报道，所以河豚毒素也称圆毒素、蟒螈毒素、东方豚毒素等。我国研究河豚毒素历史悠久，最早在《山海经》中就有记载，《神农本草经》、《开宝本草》、《本草纲目》等都有关于河豚的记载。

自古以来河豚毒素就和人类结下了不解之缘，它可以做成水煎剂，在19世纪50年代就有广泛的应用。河豚毒素的化学研究始于1909年。1964年京都国际天然产物化学会议上，同时公布了美国、日本三个研究小组测定的正确分子结构(见右图)，是一种分子量不大但结构很复杂的笼形原酸酯类生物碱。分子主要由3个氮原子组成，它们与氢氧原子形成特殊的结构，含有1个碳环、1个胍基、6个羟基，在C-5和C-10位有一个半醛糖内酯连接着分开的环，据称是“自然界最奇特的分子之一”。

河豚毒素的英文名称：Tetrodotoxin，缩写作TTX。分子式C₁₁H₁₇N₃O₈，分子量319.27。化学名称：八氢-12-(羟甲基)-2-亚氨基-5，9，7，10a-二甲基-10aH-[1，3]二氧桥[6，5-d]嘧啶-4，7，10，11，12-五醇。系统命名：Octahyd10-12-(hydroxytnethyl)-2-imino-5，9，7，10a-dimenthano-10ah-[1，3]dioxocino[6，5-d]pyrimidinc-4，7，10，11，12-pentol。

河豚毒素是一种弱碱性动物生物碱，为非蛋白质神经毒素，有剧毒，其毒性比氰化钠还强1000倍。河豚毒素的作用机理是钠离子通道阻断，是药理学研究的工具药，还可以用作分子探针。

河豚毒素最吸引科技人员研究开发的主要原因是它对药物滥用的脱瘾治疗，即快速生理脱毒的临床效果，尤其对海洛因的脱瘾治疗(5-7天)更显奇效。药物滥用是困扰世界的难题，变快的生活节奏、激烈的竞争带来的压力、家庭单位的小型化、人们对信仰的缺失、经济的快速发展和教育的滞后等，催生出一个庞大的毒品市场。由于贩毒所带来的高额利润回报，诱使很多不法分子铤而走险，使毒品走私国际化、集团化，毒品纯度越来越高。目前关于戒毒尚无良药，普遍采用替代递减疗法，即以小毒代大毒，以低毒代高毒，如丁丙诺非、美沙酮、路托菲、纳曲酮等，几乎都是阿片类受体激动剂，都有依赖性和较强的毒副作用。而河豚毒毒素是一种钠离子通道阻断剂，既通过神经中枢又通过外周神经、发挥与杜冷丁和阿司匹林不同的镇痛作用，有明显的拒抗阿片类药物所致的戒断综合症，是一种无成瘾性、无毒副作用的理想戒毒药物。

河豚毒素不但可以用于治疗外伤性疼痛、神经性疼痛、癌症疼痛、术后疼痛，还有治疗皮肤病如湿疹、癣、疥等，还有去腐生新的作用如烧伤、烫伤、疖、痈等的治疗，在壮阳及治疗女性性冷淡方面也有良好的疗效，也有关于治疗高血压等相关的报道。

关于河豚毒素的提取，最早源于日本从河豚鱼中提出粗品，我国也有很多关于河豚毒素提取的相关报道，其方法主要有树脂活性炭吸附法、二步树脂法、多级膜过滤法等等。但这些方法都是通过长期浸泡来制备河豚毒素原液，时间长易腐败。尽管可以采用了低温浸泡等措施，也很难避免药液和药渣腐败的现象发生。而碳柱吸附的方法，碳的前处理比较繁琐，同时存在碳对河豚毒素不可逆吸附的缺陷。另外，大型膜过滤方法对资金的需求较大，不易实现产业化。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型、高效的由动物原料提取高纯度单一物质，特别是一种由河豚鱼籽和肝脏中获得高纯度河豚毒素的提取方法，提高河豚鱼毒素的提取率、纯度、稳定性和效率，简化提取工艺。

为实现上述目的，本发明采用的工艺步骤包括：超声波快速溶出、有机溶剂脱脂、板框多级过滤、阳离子离子交换树脂、小型膜过滤及高效液相制备等方法，对河豚毒素进行提取、分离、制备，获得高纯度、高稳定性河豚毒素单体。