[发明专利]一种高纯度河豚毒素的提取方法

权利要求书

1.一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

a、原液制备：

将河豚鱼籽或肝脏分割成块或条，加1-5倍的去离子水，置于超声波中超声1-2小时，连续3-5次，至检测无河豚毒素止；超声后的料液置于甩水机中，将料液甩出；合并甩出料液，快速煮沸5-15分钟，快速冷却，用300-400目的滤布将蛋白等固形物滤出，将料液用二氯甲烷脱脂，再用板框过滤机用滤纸和微孔滤膜进行两级过滤，板框透过液转离子交换系统备用；

b、离子交换：

将a步骤中经板框过滤后的原液，上阳离子交换柱进行离子交换，用5-20％的醋酸开始洗脱，用动物法监测出毒时间，洗脱至流出液无毒停止收集，合并收集液备用；

c、膜过滤：

将b步骤中经离子交换后的收集液，进入膜过滤系统进行超滤和纳滤，进一步对其进行脱水浓缩，去除分子量1000以上和200以下的非有效成分，并减压浓缩至小体积备用；

d、高效液相色谱制备

将c步骤中经膜过滤后的料液用高效液相色谱制备，收集有效成分，低温减压浓缩，置冰箱中低温冷藏备用；

e、结晶：

将d步骤中置冰箱中冷藏后的液体，加8-15％的氨水调PH8-10，强力振摇，低温沉降后，得河豚毒素白色沉淀；将白色沉淀用离心机高速离心，用乙醇洗涤后减压干燥，得99％以上的高纯度河豚毒素结晶。

2.根据权利要求1所述的一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征是：步骤a所述的超声时间为0.5-2小时，所述的脱脂溶剂是二氯甲烷，所述的微孔滤膜的孔径为0.22-10微米。

3.根据权利要求1所述的一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征是：步骤b所述的离子交换树脂为D152大孔丙烯酸阳离子交换树脂(弱酸型)，洗脱液的为稀醋酸，其浓度为5-25％。

4.根据权利要求1所述的一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征是：步骤c所述的超滤和纳滤的温度为20-30℃，其工作压力为10-20帕。

5.根据权利要求1所述的一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征是：步骤d所述的高效液相色谱制备柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为0.5-2/1000的磷酸盐缓冲液与适量甲醇的混合溶液。

6.根据权利要求1所述的一种高纯度河豚毒素的提取方法，其特征是：步骤e所述的低温沉降温度为0-10℃，所述的氨水的浓度为8-15％。