[发明专利]一种简便快速鉴别甘蓝型油菜小孢子再生的单倍体的方法

摘要

本发明属于植物细胞学技术领域，具体涉及一种使用叶绿体计数法，在早期简便快速、大批量鉴别甘蓝型油菜小孢子再生的单倍体的方法。特征是，将离体小孢子培养成的胚状体接种在B5培养基。在胚状体刚发育成完整植株时，无菌切取第5片平展叶。用碘-碘化钾染色该叶片中间部位的下表皮组织。用光学显微镜观察气孔保卫细胞的叶绿体。每张制片(即一片叶)记录10个气孔的叶绿体数。之中，有7个以上气孔均具有6-8个叶绿体，其植株为单倍体。本方法解决了单倍体长时间继代培养问题，一万株可节约试剂、土地和人工费用19083元。本发明程序简便，易操作，仅用5分钟时间鉴别一株苗，费用低，可用于鉴别大量的植株倍性，提高了双单倍体(DH)技术的应用效率。

主权项

一种早期快速鉴定甘蓝型油菜小孢子试管苗单倍体的方法，其特征在于，它包含下列步骤：1)在无菌条件下取离体培养获得的甘蓝型油菜小孢子试管苗基部往上的第5片平展叶，用刀片切取叶片中间组织，置于载玻片上，然后用镊子将其上表皮和叶肉细胞轻轻夹碎去掉，仅留下表皮组织，向所述的下表皮组织加一滴染色液，盖上盖玻片，染色2min，每片叶制成一张玻片，得到鉴定用的玻片；2)将步骤1)的鉴定用的玻片置于光学显微镜的载物台上，用16倍目镜和40倍物镜头观察气孔保卫细胞中的叶绿体，每张鉴定用的玻片记录10个气孔的叶绿体数，即每株观察一片叶，每片叶统计10个气孔的叶绿体数；3)根据步骤2所得叶绿体参数鉴定试管苗植株群体中的单倍体，双单倍体和四倍体；染色液的配制方法如下所示：将0.5g的碘倒入小烧杯中，加40ml蒸馏水进行溶解，溶解后再加入碘化钾1.0g；用蒸馏水定容至50ml。