[发明专利]去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备方法及其应用

摘要

本发明一种去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备方法及其应用，属于免疫亲和层析及兽药残留检测技术领域。公开了去氢甲睾酮多抗免疫亲和柱的制备方法及应用。通过将免疫动物得到的多克隆抗体纯化以后与CNBr-Sepharose4B偶联得到的免疫亲和吸附剂填充于固相萃取管中制得了对去氢甲睾酮具有特异性吸附的免疫亲和柱。本发明制备的免疫亲和柱能够与去氢甲睾酮特异性结合，其最大结合容量约为160ngDMT；采用的洗脱液为80%的甲醇-水溶液时，平均加标回收率为97.87%；；重复使用3次，回收率不低于90%。本发明可以应用于去氢甲睾酮的快速检测。

主权项

本发明所述的DMT多克隆抗体免疫亲和柱的制备方法，按照下述步骤进行制备：（1）偶联：取免疫动物并经纯化的DMT多克隆抗体与溶胀后的CNBr‑Sepharose 4B湿凝胶置于偶联缓冲液中在室温下振荡偶联；（2）封闭：将偶联凝胶产物转入其5‑10倍体积的封闭缓冲液中，室温下振荡反应2 h；（3）洗涤：先分别用5‑10倍封闭后凝胶体积的醋酸盐缓冲液和Tris‑HCl缓冲液交替洗涤3次，然后用5‑10倍封闭后凝胶体积的PBS缓冲液洗涤2次，制备得到免疫亲和吸附剂；（4）装柱：将得到的免疫亲和吸附剂填充入固相萃取管中，加入PBS缓冲液后自然沉降，制成DMT多克隆抗体免疫亲和柱，于4 ℃保存待用。