[发明专利]去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备方法及其应用

权利要求书

1.本发明所述的DMT多克隆抗体免疫亲和柱的制备方法，按照下述步骤进行制备：

（1）偶联：取免疫动物并经纯化的DMT多克隆抗体与溶胀后的CNBr-Sepharose 4B湿凝胶置于偶联缓冲液中在室温下振荡偶联；

（2）封闭：将偶联凝胶产物转入其5-10倍体积的封闭缓冲液中，室温下振荡反应2 h；

（3）洗涤：先分别用5-10倍封闭后凝胶体积的醋酸盐缓冲液和Tris-HCl缓冲液交替洗涤3次，然后用5-10倍封闭后凝胶体积的PBS缓冲液洗涤2次，制备得到免疫亲和吸附剂；

（4）装柱：将得到的免疫亲和吸附剂填充入固相萃取管中，加入PBS缓冲液后自然沉降，制成DMT多克隆抗体免疫亲和柱，于4 ℃保存待用。

2.根据权利要求1所述的一种去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱，其特征在于其中步骤（1）中所述的DMT多克隆抗体与CNBr-Sepharose 4B干胶的质量比为1:100；所述的偶联缓冲液为pH 8.3、含0.5 mol/L NaCl 的0.1 mol/L NaHCO₃偶联缓冲液；所述的溶胀CNBr-Sepharose 4B的溶液为1 mmol/L HCl溶液。

3.根据权利要求1所述的一种去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱，其特征在于其中步骤（2）中所述的封闭缓冲液为pH 8.0、含0.5 mol/L NaCl 的0.1 mol/L Tris-HCl封闭缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱，其特征在于其中步骤（3）中所述的醋酸盐缓冲液为pH 4.0、含0.5 mol/L NaCl的0.1 mol/L 醋酸盐缓冲液；所述的Tris-HCl缓冲液为pH 8.0、含0.5 mol/L NaCl的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液；所述的PBS缓冲液为pH 7.4、0.01 mol/L的PBS缓冲液。

5.去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的应用，可以应用于去氢甲睾酮的快速检测。