[发明专利]一种减少引物二聚体非特异性扩增的转录等温扩增技术

摘要

本发明“一种减少引物二聚体非特异性扩增的转录等温扩增技术”为一种RNA扩增检测技术，其特征是选取靶RNA扩增序列，其两端引物选中间4-8base同序的引物序列并在其5’端加上噬菌体启动子序列，通过这种嵌合引物的“引入”，靶RNA逆转录成带启动子序列的cDNA，利用噬菌体RNA聚合酶识别、结合启动子并大量转录cDNA启动子下游序列成大量RNA片段。所述的带启动子中间部分同序引物限制了过量引物间二聚体非特异性扩增及转录，提高了转录等温扩增检测的可靠性。

主权项

“一种减少引物二聚体非特异性扩增的转录等温扩增技术”，其特征是借助cDNA步骤的等温扩增大量RNA产物，靶RNA加入带噬菌体启动子序列的引物，以逆转录酶催化生成第一链或两条链均带启动子的cDNA，再以噬菌体RNA聚合酶结合启动子转录大量拷贝RNA产物并循环反应大量扩增的过程，扩增产物通过特异性荧光探针检测。所述的带启动子序列的引物是指选择靶特异性的中间4‑8base同序的一对引物，其5’端均加上噬菌体启动子序列，如此高度近似的一对引物存在两段相同序列，最大程度地限制了过量引物间二聚体的非特异性扩增及转录，大大提高了转录介导的恒温扩增技术可靠性。