[发明专利]一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法无效
| 申请号： | 201010618840.6 | 申请日： | 2010-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN102146360A | 公开（公告）日： | 2011-08-10 |
| 发明（设计）人： | 李霞;韩凤;何睿;陈灿玉;焦艳华;梁媛媛;黄志坚;谢恬 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;俞慧 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法，包括如下步骤：(1)番薯清洁后取皮，加入pH 7.0-8.0的磷酸盐缓冲液，0-15℃均浆抽提，抽提后过滤，得滤液；(2)取滤液边搅拌边加入双水相萃取剂固体硫酸铵和PEG6000，使硫酸铵的质量百分比浓度为20-30％，PEG6000的质量百分比浓度为6-8％，充分搅拌溶解后，0-15℃静置分层，取下层溶液即为粗酶液；(3)由步骤(2)得到的粗酶液直接经Phenyl Sepharose6 fast flow疏水层析，上样后用0-1mol/L的硫酸铵水溶液梯度洗脱，收集呈酶活性的洗脱液后冻干；(4)冻干粉经凝胶层析和离子层析得到所述的过氧化物酶。本发明更好地解决材料来源的问题并可以提高效率和酶活。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分离 提取 番薯 过氧化物 方法 | ||
【主权项】：
一种分离提取番薯皮中过氧化物酶的方法，包括如下步骤：(1)番薯清洁后取皮，加入pH 7.0‑8.0磷酸盐缓冲液，0‑15℃均浆抽提，抽提后过滤，得滤液；(2)取滤液边搅拌边加入双水相萃取剂固体硫酸铵和PEG6000，使硫酸铵的质量百分比浓度为20‑30％，PEG6000的质量百分比浓度为6‑8％，充分搅拌溶解后，0‑15℃静置分层，取下层溶液即为粗酶液；(3)由步骤(2)得到的粗酶液直接经Phenyl Sepharose6fast flow疏水层析，上样后用0‑1mol/L的硫酸铵水溶液梯度洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；(4)步骤(3)所得冻干粉通过下列a或者b的方法处理，得到过氧化物酶制品；a.冻干粉溶于生理盐水，经Sepharose CL‑6B凝胶层析，用生理盐水洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；冻干粉溶解于pH 7.1‑8.5的Tris‑HCl缓冲液中，对Tris‑HCl缓冲液透析，透析液上样，经ToYoPEAPL DEAE‑650M离子层析，用0‑1mol/L氯化钠水溶液线性洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，透析，冻干，即为过氧化物酶制品；b.冻干粉溶解于pH 7.1‑8.5的Tris‑HCl缓冲液中，对Tris‑HCl缓冲液透析，透析液上样，经ToYoPEAPL DEAE‑650M离子层析，用0‑1mol/L氯化钠水溶液线性洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，冻干；冻干粉溶于生理盐水，经SepharoseCL‑6B凝胶层析，用生理盐水洗脱，收集呈酶活性的洗脱液，透析，冻干，即为过氧化物酶制品。
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