[发明专利]GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用

摘要

本发明公开了一种GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用。本发明通过设计常用的外源基因的引物，包括5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因，草丁膦乙酰转移酶基因，草丁膦乙酰转移酶基因，玄参花叶病毒35S启动子，花椰菜花叶病毒35S启动子，胭脂碱合成酶基因终止子，进行PCR和毛细管电泳，根据毛细管电泳的结果进行分析；其中PCR为通过采用通用引物引发靶基因扩增。这种PCR能有效解决多重PCR过程中的扩增偏爱性，提高检测灵敏度；毛细管电泳能提高分辨率；根据扩增产物片段长度判断结果，有助于提高检测特异性。本发明为转基因植物的检测提供了较为可靠和简便的检测方法，所建立的体系可重复性高，经多次试验稳定性好。

主权项

一种GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)设计外源基因和内源基因的引物，下述引物均为5’‑3’；外源基因5‑莽草酸‑3‑磷酸合成酶基因的上下游引物分别为：EPSPS‑F：AGGTGACACTATAGAATAGTTGCGGCCCTGCTTGTTEPSPS‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGGCGGTCGCTTTCCTTGA；外源基因花椰菜花叶病毒35S启动子的上下游引物分别为：CaMV35s‑F AGGTGACACTATAGAATAGCTCCTACAAATGCCATCACaMV35s‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGATAGTGGGATTGTGCGTCA；外源基因胭脂碱合成酶基因终止子的上下游引物分别为：NOS‑F：AGGTGACACTATAGAATAATCGTTCAAACATTTGGCANOS‑R：GTACGACTCACTATAGGGAATTGCGGGACTCTAATCATA；外源基因杆菌草丁膦乙酰转移酶基因的上下游引物分别为：Bar‑F：AGGTGACACTATAGAATATCTGCACCATCGTCAACCACTBar‑R：GTACGACTCACTATAGGGACTCCAGGGACTTCAGCAGGTG；外源基因草丁膦乙酰转移酶基因的上下游引物分别为：PAT‑F：AGGTGACACTATAGAATACGGAGAGGAGACCAGTTGAGPAT‑R：GTACGACTCACTATAGGGATGGGTGTTTGTGGCTCTGT；外源基因玄参花叶病毒35S启动子的上下游引物分别为：FMV35S‑F：AGGTGACACTATAGAATAAAGACATCCACCGAAGACTTAFMV35S‑R：GTACGACTCACTATAGGGAAGGACAGCTCTTTTCCACGTT；内源基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的上下游引物分别为：PEP‑F：AGGTGACACTATAGAATAGCTAGTGTAGACCAGTTCTTGPEP‑R：GTACGACTCACTATAGGGACACTCTTGTCTCTTGTCCTC；内源基因植物大豆凝集素基因的上下游引物分别为：Lectin‑F：AGGTGACACTATAGAATAGCCCTCTACTCCACCCCCATCCLectin‑R：GTACGACTCACTATAGGGAGCCCATCTGCAAGCCTTTTTGTG；上游通用引物为：AGGTGACACTATAGAATA；其中该引物进行荧光标记；下游通用引物为：GTACGACTCACTATAGGGA；其中该引物进行荧光标记；(2)提取样品的基因组；(3)进行多重PCR：以步骤(2)得到的基因组为模板，步骤(1)中所述外源基因和内源基因的引物可以自由组合，所述的上游通用引物和下游通用引物为必需引物，进行PCR，得到PCR产物；(4)毛细管电泳检测PCR产物；(5)对结果进行分析。