[发明专利]GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用

权利要求书

1.一种GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)设计外源基因和内源基因的引物，下述引物均为5’-3’；

外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因的上下游引物分别为：

EPSPS-F：AGGTGACACTATAGAATAGTTGCGGCCCTGCTTGTT

EPSPS-R：GTACGACTCACTATAGGGAGGCGGTCGCTTTCCTTGA；

外源基因花椰菜花叶病毒35S启动子的上下游引物分别为：

CaMV35s-F AGGTGACACTATAGAATAGCTCCTACAAATGCCATCA

CaMV35s-R：GTACGACTCACTATAGGGAGATAGTGGGATTGTGCGTCA；

外源基因胭脂碱合成酶基因终止子的上下游引物分别为：

NOS-F：AGGTGACACTATAGAATAATCGTTCAAACATTTGGCA

NOS-R：GTACGACTCACTATAGGGAATTGCGGGACTCTAATCATA；

外源基因杆菌草丁膦乙酰转移酶基因的上下游引物分别为：

Bar-F：AGGTGACACTATAGAATATCTGCACCATCGTCAACCACT

Bar-R：GTACGACTCACTATAGGGACTCCAGGGACTTCAGCAGGTG；

外源基因草丁膦乙酰转移酶基因的上下游引物分别为：

PAT-F：AGGTGACACTATAGAATACGGAGAGGAGACCAGTTGAG

PAT-R：GTACGACTCACTATAGGGATGGGTGTTTGTGGCTCTGT；

外源基因玄参花叶病毒35S启动子的上下游引物分别为：

FMV35S-F：AGGTGACACTATAGAATAAAGACATCCACCGAAGACTTA

FMV35S-R：GTACGACTCACTATAGGGAAGGACAGCTCTTTTCCACGTT；

内源基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的上下游引物分别为：

PEP-F：AGGTGACACTATAGAATAGCTAGTGTAGACCAGTTCTTG

PEP-R：GTACGACTCACTATAGGGACACTCTTGTCTCTTGTCCTC；

内源基因植物大豆凝集素基因的上下游引物分别为：

Lectin-F：AGGTGACACTATAGAATAGCCCTCTACTCCACCCCCATCC

Lectin-R：GTACGACTCACTATAGGGAGCCCATCTGCAAGCCTTTTTGTG；

上游通用引物为：AGGTGACACTATAGAATA；其中该引物进行荧光标记；

下游通用引物为：GTACGACTCACTATAGGGA；其中该引物进行荧光标记；

(2)提取样品的基因组；

(3)进行多重PCR：以步骤(2)得到的基因组为模板，步骤(1)中所述外源基因和内源基因的引物可以自由组合，所述的上游通用引物和下游通用引物为必需引物，进行PCR，得到PCR产物；

(4)毛细管电泳检测PCR产物；

(5)对结果进行分析。

2.根据权利要求1所述GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的PCR为根据样本的种属不同，选择引物：

①当样本为大豆时，引物为EPSPS-F、EPSPS-R、CaMV35s-F、CaMV35s-R、NOS-F、NOS-R、Lectin-F和Lectin-R按等摩尔比混合得到的引物A，以及上游通用引物和下游通用引物按等摩尔比混合得到的引物D；

②当样本为菜籽时，引物为Bar-F、Bar-R、PAT-F、PAT-R、FMV35S-F、FMV35S-R、NOS-F、NOS-R、PEP-F和PEP-R按等摩尔比混合得到的引物B，以及上游通用引物和下游通用引物按等摩尔比混合得到的引物D；

③当样本为大豆和菜籽混合物时，引物为EPSPS-F、EPSPS-R、CaMV35s-F、CaMV35s-R、Bar-F、Bar-R、PAT-F、PAT-R、FMV35S-F、FMV35S-R、NOS-F和NOS-R按等摩尔比混合得到的引物C，以及上游通用引物和下游通用引物按等摩尔比混合得到的引物D。