[发明专利]检测RNA分子的方法、试剂盒及其相关用途

摘要

本发明涉及检测RNA分子的方法、试剂盒及其相关用途。第一方面，本发明涉及检测RNA分子的方法，所述方法包括以下步骤：提供含有所述RNA分子的样品；将第一多核苷酸与所述RNA分子杂交；延伸所述第一多核苷酸以产生第一链cDNA；将第二多核苷酸与所述第一链cDNA杂交；延伸所述第一链cDNA以产生延伸反应产物；通过聚合酶链式反应扩增所述延伸反应产物；以及通过实时荧光读出，检测扩增产物。另一方面，本发明涉及试剂盒，所述试剂盒包含如本发明所定义的第一和第二多核苷酸、一组dNTPs、逆转录酶和检测部分。另一方面，本发明涉及所述试剂盒用于检测RNA分子的用途。

主权项

检测RNA分子的方法，所述方法包括以下步骤：a) 提供含有所述RNA分子的样品；b) 将包含第一引物结合位点的第一多核苷酸与所述RNA分子杂交；c) 通过逆转录所述RNA分子的序列延伸所述第一多核苷酸以产生第一链cDNA；d) 将第二多核苷酸与所述第一链cDNA杂交，其中所述第二多核苷酸是3´‑不可延伸的寡核苷酸，其包含(i) 3´‑部分，其与所述第一链cDNA的一部分互补，以及(ii) 5´‑突出端，其包含第二引物结合位点的序列；并且其中所述第二多核苷酸包含至少一个或几个dU核苷酸残基；e) 在不存在dUTP的情况下，延伸所述第一链cDNA以产生延伸反应产物，所述延伸反应产物包含与所述第二引物结合位点互补的序列；以及通过优选不耐热的尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)的酶促反应消化所述第二多核苷酸；f) 在检测部分存在的情况下，使用与所述第一引物结合位点互补的第一引物和与所述第二引物结合位点互补的第二引物，通过聚合酶链式反应扩增所述延伸反应产物；以及g) 通过实时荧光读出而检测所述扩增产物。