[发明专利]绵羊MSTN基因启动子区两个新SNP位点检测及其检测方法的建立

摘要

本发明的绵羊MSTN基因启动子区两个新SNP位点检测及其检测方法的建立，分步骤；其1确定绵羊myostatin基因启动子区的两个单核苷酸突变位点，位于GeneBank序列，登记号：DQ530260；从起始密码子ATG开始第-959位和-784位，即为SNP位点(-959T/C，-784G/A)，表现为6种基因型(TT，TC，CC，GG，GA，AA)；其2检测到上述突变等位基因的三条特异性引物，长度分别为22bp、22bp、21bp；第一条引物用于MSTN基因的启动子区测序，第二、三条引物分别结合到两个突变等位基因模板链上，扩增到等位基因突变的目的基因；其3通过设计的寡核苷酸引物，对样品的基因组DNA进行PCR扩增，对扩增到985bp和121bp片段的产物，利用Psp1406I和Rsa I限制性内切酶进行酶切分析，建立SNP位点的PCR-RFLP检测体系，进而得到两个单核苷酸突变位点的多态性。

主权项

绵羊MSTN基因启动子区两个新SNP位点检测及其检测方法的建立，其特征在于：分以下步骤；其1确定绵羊myostatin基因启动子区的两个单核苷酸突变位点，位于GeneBank序列，登记号：DQ530260；从起始密码子ATG开始第‑959位和‑784位，即为SNP位点(‑959T/C，‑784G/A)，表现为6种基因型(TT，TC，CC，GG，GA，AA)；其2检测到上述突变等位基因的三条特异性引物，长度分别为22bp、22bp、21bp；其中P1引物F：TGAGAGTTTGATCCCTACAGAG，R：TGGCTTCTAGTCTTGAGGATT；用于MSTN基因的启动子区测序；P2引物F：TGAGAGTTTGATCCCTACAGAG，R：GAGCTGATTCATTTGACTACTTC；和P3引物F：GTAGTCAATCGAAACTGAAGT，R：CCCTGAATAAATTCTTAGCAC；分别结合到两个突变等位基因模板链上，扩增到等位基因突变的目的基因；其3通过设计的寡核苷酸引物，对样品的基因组DNA进行PCR扩增，对扩增到985bp和121bp片段的产物，利用Psp1406I和Rsa I限制性内切酶进行酶切分析，建立SNP位点的PCR‑RFLP检测体系，进而得到两个单核苷酸突变位点的多态性。