[发明专利]用于干扰目标序列的RNAi片段及RNAi表达载体

摘要

本发明属于分子生物学，涉及一种用于干扰目标序列的RNA i片段及其制备方法，所述方法为根据目标序列得到一个可以形成颈环结构的理论序列，根据该理论序列设计并分段合成该序列以及该序列的反向互补序列，将分段合成的序列磷酸化，然后将磷酸化后的序列混合，变性，退火，最后与酶切后的RNAi表达载体连接即得到用于干扰目标序列的RNA i表达载体。本发明还涉及含有用于干扰目标序列的RNA i片段的重组载体及其制备方法，以及所述RNAi片段用于构建RNAi表达载体的用途。本发明所述方法用于构建RNAi表达载体时，能够简化实验步骤，节省实验时间，降低实验成本。

主权项

一种用于干扰目标序列的RNAi片段，其特征在于所述RNAi片段是通过以下方法得到的：1)针对需要干扰的目标序列，任意设计一段不与目标序列互补的序列S，得到一个理论序列，即5’‑目标序列‑序列S‑目标序列的反向互补序列‑3’；2)将1)中所述理论序列分N段合成，得到一定大小的N段核苷酸序列，所述N段核苷酸序列按照理论序列从5’到3’的顺序分别命名为F1‑FN；将所述理论序列的反向互补序列分M段合成，得到一定大小的M段核苷酸序列，所述M段核苷酸序列按照理论序列的反向互补序列从5’到3’的顺序分别命名为R1‑RM；同时在F1和R1的5’端分别添加含有限制性内切酶酶切位点粘性末端或平末端的核苷酸序列；其中与F(N‑1)末端和FN首端的核苷酸序列互补的序列，存在于同一条对应的M段核苷酸序列之一上；3)将N段核苷酸序列和M段核苷酸序列的5’‑OH分别进行磷酸化；4)将磷酸化后的N段核苷酸序列和M段核苷酸序列等比例混合，先变性，再退火，得到用于干扰目标序列的RNAi片段；在退火后可任选地加入对退火产物中符合理论序列大小的片段进行纯化的步骤。