[发明专利]一种制备β-内酰胺酶抑制多肽的方法及所用的表达载体

摘要

本发明公开了一种制备β-内酰胺酶抑制多肽的方法及其中所用的表达载体、融合蛋白等。本发明制备β-内酰胺酶抑制多肽的方法包括以下步骤：1)构建一种表达His tag融合蛋白的重组表达载体，该His tag融合蛋白是β-内酰胺酶抑制多肽-TEV蛋白酶切割位点-His tag的融合蛋白；2)转化宿主细胞，得转化子；3)培养转化体，表达所述的His tag融合蛋白；4)用金属螯合亲和层析法纯化获得His tag融合蛋白；5)用TEV蛋白酶酶切His tag融合蛋白；和6)用凝胶柱层析法分离纯化获得β-内酰胺酶抑制多肽。本发明中TEV蛋白酶的酶切效果理想，并且所用的TEV蛋白酶的价格相对较低，因此β-内酰胺酶抑制多肽的纯化难度以及成本都大大降低。

主权项

一种制备β‑内酰胺酶抑制多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建一种表达β‑内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白的重组表达载体，该β‑内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白是β‑内酰胺酶抑制多肽‑TEV蛋白酶切割位点‑His tag的融合蛋白；2)用步骤1)所述的重组表达载体转化宿主细胞，得转化子；3)培养步骤2)所述的转化体，表达所述的His tag融合蛋白；4)用金属螯合亲和层析法从步骤3)所得的培养物中纯化获得His tag融合蛋白；5)用TEV蛋白酶酶切步骤4)纯化得到的His tag融合蛋白；和6)用凝胶柱层析法从步骤5)得到的酶切物中分离纯化获得β‑内酰胺酶抑制多肽。