[发明专利]一种制备β-内酰胺酶抑制多肽的方法及所用的表达载体

权利要求书

1.一种制备β-内酰胺酶抑制多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)构建一种表达β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白的重组表达载体，该β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白是β-内酰胺酶抑制多肽-TEV蛋白酶切割位点-His tag的融合蛋白；

2)用步骤1)所述的重组表达载体转化宿主细胞，得转化子；

3)培养步骤2)所述的转化体，表达所述的His tag融合蛋白；

4)用金属螯合亲和层析法从步骤3)所得的培养物中纯化获得His tag融合蛋白；

5)用TEV蛋白酶酶切步骤4)纯化得到的His tag融合蛋白；和

6)用凝胶柱层析法从步骤5)得到的酶切物中分离纯化获得β-内酰胺酶抑制多肽。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的载体是质粒pET32a，且其含有位于His tag序列和多克隆位点之间的TEV蛋白酶切割位点序列，以及在多克隆位点中插入了β-内酰胺酶抑制多肽的编码序列。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的β-内酰胺酶抑制多肽的编码序列是如序列表中SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；所述的TEV蛋白酶切割位点序列是如序列表中SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

4.一种制备β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)构建一种表达β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白的重组表达载体，该β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白是β-内酰胺酶抑制多肽-TEV蛋白酶切割位点-His tag的融合蛋白；

2)用步骤1)所述的重组表达载体转化宿主细胞，得转化子；和

3)培养步骤2)所述的转化体，表达所述的His tag融合蛋白。

5.一种表达β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白的重组表达载体，其特征在于，该β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白是β-内酰胺酶抑制多肽-TEV蛋白酶切割位点-His tag的融合蛋白。

6.一种β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白，其特征在于，该β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白是β-内酰胺酶抑制多肽-TEV蛋白酶切割位点-His tag的融合蛋白。

7.一种DNA分子，其编码β-内酰胺酶抑制多肽的His tag融合蛋白，其特征在于，是下列之一：

1)其核苷酸序列是序列表中SEQ ID NO.1所示；

2)其编码如序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽。

8.一种转化体，其特征在于，其含有如权利要求5所述的重组表达载体。

9.一种β-内酰胺酶抑制多肽，其特征在于，其氨基酸序列为如序列表中SEQ ID NO.3所示的序列。

10.如权利要求6或9所述的β-内酰胺酶抑制多肽或β-内酰胺酶抑制多肽His tag融合蛋白在制备治疗或预防细菌感染疾病的药物中的应用。