[发明专利]一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法

摘要

本发明提供了一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法。该方法在乙酰半胱氨酸在进柱前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生化试剂为Nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物。分离测定所用方法为高效液相色谱法或高效液相色谱法与质谱法联合使用，使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱。分离测定方法按下列步骤进行：（1）取乙酰半胱氨酸或含乙酰半胱氨酸的制剂，用稀酸溶液溶解，用碱溶液将pH值调至6.0-8.0，作为供试品样品溶液；（2）取乙酰半胱氨酸溶液与1mol/L碳酸盐溶液混合，加入Nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物混匀；（3）将步骤（2）所得的溶液于40-60C°避光反应，反应完毕后，加入盐酸溶液；（4）取步骤（3）所得的溶液，在预置五氧化二磷与氢氧化钾的干燥系统中，加磷酸盐缓冲溶液-乙腈，超声处理使残渣溶解，过滤，滤液作为供试品溶液；（5）用高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法分离测定步骤（4）所制得的供试品溶液。

主权项

一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法，其特征在于：乙酰半胱氨酸在进柱前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生化试剂为Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑氨基酸类化合物，述所的衍生化试剂Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑氨基酸类化合物为Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑丙胺酰胺、Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑苯丙胺酰胺、Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑脯胺酰胺或Nα‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑缬胺酰胺，乙酰半胱氨酸与衍生化试剂的摩尔比为：1:1.5～1:50；分离测定所用方法为高效液相色谱法或高效液相色谱法与质谱法联合使用，其使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，且色谱柱的检测波长为200‑380nm，最佳检测波长为333±3nm；在分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的条件中，流动相是乙酸铵溶液‑乙腈体系，乙酸铵溶液为流动相A，乙腈为流动相B，其中乙酸铵溶液的浓度为0.01‑0.05mol/L，并用氨水或磷酸调节pH值至5.0‑8.0，乙酸铵溶液与乙腈按下列异构体测定流动相梯度洗脱表进行洗脱： 异构体测定流动相梯度洗脱表时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）08020188020195050255050268020368020其中：18分钟后为冲洗色谱柱及平衡色谱柱，流动相A、B的百分比为体积百分比。