[发明专利]一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法

权利要求书

1.一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法，其特征在于：乙酰半胱氨酸在进柱前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生化试剂为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物，述所的衍生化试剂N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-苯丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-脯胺酰胺或N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-缬胺酰胺，乙酰半胱氨酸与衍生化试剂的摩尔比为：1:1.5～1:50；分离测定所用方法为高效液相色谱法或高效液相色谱法与质谱法联合使用，其使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，且色谱柱的检测波长为200-380nm，最佳检测波长为333±3nm；在分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的条件中，流动相是乙酸铵溶液-乙腈体系，乙酸铵溶液为流动相A，乙腈为流动相B，其中乙酸铵溶液的浓度为0.01-0.05mol/L，并用氨水或磷酸调节pH值至5.0-8.0，乙酸铵溶液与乙腈按下列异构体测定流动相梯度洗脱表进行洗脱：

 异构体测定流动相梯度洗脱表

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）08020188020195050255050268020368020

其中：18分钟后为冲洗色谱柱及平衡色谱柱，流动相A、B的百分比为体积百分比。

2.根据权利要求1所述的分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法，其特征在于：所述的分离测定方法按下列步骤进行：

（1）、取乙酰半胱氨酸或含乙酰半胱氨酸的制剂，用稀酸溶液溶解，用碱溶液将pH值调至6.0-8.0，加水摇匀，配制成含乙酰半胱氨酸4.1-16.4mg/L的溶液，作为供试品样品溶液，其中稀酸溶液为无机酸如稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸溶液，也可为有机酸如甲酸、乙酸溶液，所述的碱溶液为无机碱溶液如氢氧化钠、氢氧化钾、氨水溶液；

（2）、取乙酰半胱氨酸溶液与1mol/L碳酸盐溶液混合，加入N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物混匀，其中碳酸盐溶液为碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钾或碳酸钠溶液，或者是它们按任意比例混合后所得到的组合物；

（3）、将步骤（2）所得的溶液于40-60C°避光反应30-50分钟，反应完毕后，加入1-5mol/L的盐酸溶液10-30μl，其最佳条件为：加入2mol/L的盐酸溶液10μl；

（4）、取步骤（3）所得的溶液，在预置五氧化二磷与氢氧化钾的干燥系统中，干燥至溶液中溶剂充分挥发尽后，加pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液-乙腈1ml，其中磷酸盐缓冲溶液与乙腈的比例为1:1,超声处理使残渣溶解，过滤，滤液作为供试品溶液；

（5）、用高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法分离测定步骤（4）所制得的供试品溶液。