[发明专利]一种广谱高效提取植物RNA的试剂盒

摘要

本发明公开了一种广谱、高效从各种植物组织中提取RNA的方法，属生物化学技术领域。以硼酸缓冲液为缓冲体系首先有效分离和富集植物组织RNA，再以三羟甲基氨基甲烷Tris-盐酸HCl-乙二胺四乙酸钠EDTA-Na2-氯化钠NaCl为提取缓冲液、十六烷基三甲基溴化铵CTAB为去污剂，并加入1mol/L异硫氰酸胍作为强变性剂迅速抑制RNase活性，提取高品质RNA。该方法不仅可以提取棉花胚珠、花药、叶片、纤维等组织中的RNA，而且可以从拟南芥、水稻、马塘以及香蕉(果皮、果肉)、马尾松、雪松等顽拗性植物中提取高品质的RNA。该方法提取RNA产率高，纯度高，没有盐类的污染。成本低，适合商品化开发，成为一种广谱、高效提取植物RNA的专用试剂盒。

主权项

一种广谱、高效从植物中提取RNA的试剂盒，包括：(1)提取缓冲溶液I，即硼砂‑十二烷基磺酸钠SDS提取缓冲液：质量体积百分比浓度为2％的SDS，0.0125mol/L硼砂，用硼酸调节pH到8.5，加入焦炭酸二乙酯DEPC使浓度达到0.1％体积百分比，高温高压灭菌；(2)提取缓冲溶液II，即十六烷基三甲基溴化铵CTAB提取缓冲液：100mol/L pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷Tris‑盐酸HCl，20mmol/L pH为8.0的乙二胺四乙酸钠EDTA‑Na2，质量体积百分比浓度为2％的CTAB，1.4mol/L氯化钠NaCl，质量体积百分比浓度为2％的聚乙烯吡咯烷酮PVP，体积百分比浓度为1％的β‑巯基乙醇，1mol/L异硫氰酸胍；(3)3mol/L pH为5.2的醋酸钠NaAc溶液：4.801g NaAc·3H2O或3.566g NaAc·H2O溶于8mL水，用冰醋酸调pH至5.2，加入10μL DEPC，定容至10mL，高温高压灭菌；(4)8mol/L氯化锂LiCl：33.91g LiCl溶于100mL水，加入100μL DEPC，高温高压灭菌；(5)异丙醇：纯度100％；(6)DEPC水或称无RNase水：体积百分比浓度0.1％DPEC的双蒸水溶液，高温高压灭菌。