[发明专利]一种诱导菊花体细胞胚间接发生的方法

摘要

本发明公开一种诱导菊花体细胞胚间接发生的方法，包括先从外植体中诱导出胚性愈伤组织，再将获得的胚性愈伤组织连续转接到两个不同的培养基中诱导体细胞胚的间接分化，得到菊花稳定的再生植株，从而实现菊花的再生和快速繁殖，并以之为栽培材料，进行菊花的规范化、规模化生产。

主权项

一种诱导菊花体细胞胚间接发生的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、获得菊花无菌苗：将表面灭菌的菊花带腋芽茎段接种到以MS为基本培养基，添加了6‑苄氨基嘌呤6‑BA1.0mg/L、萘乙酸NAA0.1mg/L、质量分数为0.75％的琼脂、质量分数为3％的蔗糖，pH6.0的培养基上，诱导丛生芽；2)从外植体诱导胚性愈伤组织：从步骤1)获得的无菌苗中切取外植体，接种到以MS为基本培养基，添加了激动素KT 1.0～2.0mg/L、2，4‑二氯苯氧乙酸2，4‑D 2.0mg/L、萘乙酸NAA 0.5～1.0mg/L，质量分数为0.75％的琼脂、质量分数为3％的蔗糖，pH 6.0的胚性愈伤组织诱导培养基上，诱导胚性愈伤组织；3)诱导胚性愈伤组织的分化：通过步骤2)获得的黄绿色致密颗粒状胚性愈伤组织后转入以MS为基本培养基，添加了激动素KT1.0～2.0mg/L、2，4‑二氯苯氧乙酸2，4‑D 1.0mg/L、萘乙酸NAA 0.5～1.0mg/L，质量分数为0.75％的琼脂、质量分数为3％的蔗糖，pH 6.0的胚性愈伤组织分化培养基一上，再转接入以MS为基本培养基，添加了激动素KT 1.0～2.0mg/L、萘乙酸NAA 0.5～1.0mg/L、质量分数为0.75％的琼脂、质量分数为3％的蔗糖，pH 6.0的胚性愈伤组织分化培养基二上诱导菊花间接体细胞胚分化和由之再生成小植株；4)获得体细胞胚再生植株：将步骤3)获得的再生植株接种到添加了0.1mg/L的萘乙酸NAA、质量分数为0.75％的琼脂、质量分数为3％的蔗糖，pH 6.0的1/2MS基本培养基上，进行生根培养，不定根长至1.0cm～2.0cm进行炼苗和移栽。