[发明专利]原核表达Arresten蛋白纯化方法

摘要

本发明涉及一种蛋白纯化技术，具体为一种原核表达Arresten蛋白的纯化方法。解决现有Arresten蛋白制备技术中存在的蛋白获得纯度低的问题。步骤为超声法破菌获得包涵体，包涵体尿素洗涤后加入Lysis buffer B裂解，吹打混匀，温和振荡溶解10min，室温静置20min至溶液变为半透明状态，离心沉淀细胞碎片，保留上清液。以0.5-1ml/min的流速上样于预先平衡好的Ni2+-NTA纯化柱，室温静置30min，然后用1倍柱体积的Lysis buffer B洗柱，保持流速在0.5-1ml/min，将纯化柱侧壁上的残留样品洗去，用5倍柱体积Wash buffer B2洗杂，洗涤过程中保持流速在1-2ml/min，用5倍柱体积的Elution buffer A3洗脱，保持流速在1-2ml/min，收集洗脱液得到纯度约97.3％的目的蛋白。

主权项

一种原核表达Arresten蛋白纯化方法，其特征在于：步骤为超声法破菌获得包涵体，包涵体尿素洗涤后加入Lysis buffer B裂解，吹打混匀，温和振荡溶解10min，室温静置20min至溶液变为半透明状态，离心沉淀细胞碎片，保留上清液，以0.5-1ml/min的流速上样于预先平衡好的Ni2+-NTA纯化柱，室温静置30min，然后用1倍柱体积的Lysis buffer B洗柱，保持流速在0.5-1ml/min，将纯化柱侧壁上的残留样品洗去，用5倍柱体积Wash buffer B2洗杂，洗涤过程中保持流速在1-2ml/min，用5倍柱体积的Elution buffer A3洗脱，保持流速在1-2ml/min，收集洗脱液得到目的蛋白，所述的Lysis buffer B为(pH7.5)10mM Tris·Cl50mM NaH2PO4300mMNaCl8M Urea10mM imidazole，所述的Wash buffer B2(pH7.5)10mM Tris·Cl50mM NaH2PO4300mMNaCl8M Urea15mM imidazole，所述的Elution buffer A3(pH5.1)10mM Tris·Cl50mM NaH2PO4300mM NaCl8M Urea。