[发明专利]原核表达Arresten蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种原核表达的Arresten蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤为超声 法破菌获得包涵体，包涵体尿素洗涤后加入Lysis buffer B裂解，吹打混匀， 温和振荡溶解10min，室温静置20min至溶液变为半透明状态，离心沉淀细 胞碎片，保留上清液，以0.5-1ml/min的流速上样于预先平衡好的Ni²⁺-NTA 纯化柱，室温静置30min，然后用1倍柱体积的Lysis buffer B洗柱，保持流 速在0.5-1ml/min，将纯化柱侧壁上的残留样品洗去，用5倍柱体积Wash buffer  B₂洗杂，洗涤过程中保持流速在1-2ml/min，用5倍柱体积的Elution buffer A₃洗脱，保持流速在1-2ml/min，收集洗脱液得到目的蛋白； 所述的Lysis buffer B为：pH7.5

10mM Tris·Cl

50mM NaH₂PO₄

300mM NaCl

8M Urea

10mM imidazole，

所述的Wash buffer B₂为：pH7.5

10mM Tris·Cl

50mM NaH₂PO₄

300mM NaCl

8M Urea

15mM imidazole，

所述的Elution buffer A₃为：pH5.1

10mM Tris·Cl

50mM NaH₂PO₄

300mM NaCl

8M Urea。